透明质酸

出处：按学科分类—工业技术 企业管理出版社《精细化学品制备手册》第303页（1315字）

制法

制备透明质酸，常用玻璃体、人脐带、公鸡冠、猪皮、兔皮等做原料。在制备过程中，选用不同的原料，其提取、分离、纯化的方法也各有异。这里重点介绍从公鸡冠中制备透明质酸方法。

(1)预处理 采集新鲜公鸡冠，投入丙酮中，浸泡过夜至鸡冠变硬为止(如不变硬可更换丙酮浸泡)。然后置瓷盘中于干燥箱中干燥，再经粉碎机粉碎成粉状。

(2)提取 按配比将粉状物倒入搪瓷缸中，加入6～7倍的蒸馏水，搅拌均匀，精置浸泡过夜，使鸡冠粉充分溶胀，然后过滤，收集滤液，滤渣再按同样方法浸泡3次，合并滤液。

(3)除杂物 将滤液移入陶瓷缸中，搅拌下加入10%的氯化钠，完全溶解后，加入等体积的氯仿，搅拌3h，然后静置分层，虹吸出上层水相(千万不可吸出氯仿)。

(4)沉淀 将以上水相倒入另一搪瓷缸中，搅拌下加入2倍体积的95%乙醇，静置沉淀过夜，虹吸出上层乙醇溶液(可回收乙醇)，滤干沉淀物，干燥后，即为粗品。

(5)分离 将粗品溶于4倍体积的10%的氯化钠溶液中，搅拌下用10%的盐酸调节pH值至4．5～5．0，加入等体积的氯仿，搅拌均匀，静置分层后，虹吸收集上层水相，再往水相中加等体积的氯仿，静置分层后吸出上层水相，移入另一瓷桶中。

(6)酶处理 在以上水相中，先用8%的氢氧化钠溶液调节水相的pH值为7．5左右，加热至37℃恒温，加入链霉蛋白酶，保温过夜，得酶解液。

(7)再次除杂物 在上述酶解液中加入等体积的氯仿，搅拌均匀，静置分层后，吸出上层水相。水相再加氯仿按同法处理2次，合并上层水相，下层液体回收氯仿用。

(8)溴代十六烷基吡啶(CPB)沉淀 将吸出的水相移入陶瓷缸中，搅拌下加入等体积的1%CPB溶液，静置过夜，滤除清液，收集沉淀物。

(9)溶解 将CPB的沉淀物用2～3倍体积的10%氯化钠溶液搅拌解离30～40min，然后用离心机离心除去沉淀物，收集解离液。

(10)乙醇沉淀 把解离液倒入陶瓷缸中，搅拌下加入3倍体积的95%乙醇，静置沉淀7～8h，虹吸除去上层乙醇液(供回收乙醇)。下层沉淀再加95%乙醇反复沉淀2次，收集下层沉淀物，吊滤至于。

(11)干燥 将吊干的产品用丙酮洗涤2次，或直接包放在石灰缸中干燥至干，即得透明质酸精品。

透明质酸是眼科手术的必备药品，在化妆品及生化试剂和药物中的应用广泛。