果实维生素C的测定(2，6－二氯靛酚滴定法)

出处：按学科分类—农业科学 中国农业出版社《果树施肥手册》第153页（3552字）

维生素C又叫抗坏血酸，它在动植物的新陈代谢方面起着重要的作用，因为它是调节植物体细胞氧化还原过程的重要因子之一。缺少它，有机体的新陈代谢就会遭到破坏。维生素C是果实中所特有的，并且有的果实中含量很高。如猕猴桃，100克鲜果中可达700～1100毫克，100克鲜枣中也有350～600毫克；而柑橘仅含有55～66毫克，苹果5～48毫克，梨3～17毫克。

一般而言，随着果实的成熟，维生素C的含量达到最高，但一采收，活性很快降低，贮藏过程中下降更快，不耐贮藏的品种更为明显。冷藏使维生素C的破坏更严重。

由于维生素C极易氧化，因此，它的测定应在采收的当天进行。

方法原理：抗坏血酸(Vc)结构中有烯二醇结构()存在，因此具有还原性，能将蓝色染料2，6－二氯靛酚还原为无色的化合物，Vc则被氧化为脱氢Vc。2，6－二靛酚具有酸碱指示及氧化还原指示的两种特性：其在碱性介质中呈深蓝色，而在酸性介质中呈浅红色(变色范围pH4～5)，其于氧化态时呈深蓝色(碱性介质中)或浅红色(酸性介质中)，还原态时为无色。据此特性，用蓝色染料碱性的标准溶液滴定果实样品酸性浸出液中Vc到刚变浅红色为终点，由染料的用量即可计算Vc的含量。滴定终点的红色是刚过量的未被还原的(氧化型)染料溶液在酸性介质中的颜色。

通常测定Vc的浸提和滴定都是在2%草酸溶液中进行的，目的是保持反应时一定的酸度，避免Vc在pH高时易被氧化。此染料不致氧化待测液中非Vc的还原性物质，所以对Vc测定有较好的选择性。

试剂：

①2%草酸溶液：称取20克草酸(三级)溶于水中，稀释至1000毫升，贮于避光处。

②6%KI溶液。

③1%淀粉指示剂。

④0．001NKIO₃溶液：称取1．784克在105℃烘过24小时的碘酸钾(KIO₃，优级)溶于水，定容至500毫升，此为0．1000NKIO₄标准溶液。使用时将此贮备标液用煮沸并冷却的水稀释100倍，即成0．001N的KIO₃标液。大约每星期应重新稀释配制一次。

⑤Vc标准溶液：称取20．0毫克Vc(分析纯)，溶于2%草酸溶液，并用2%草酸稀释至100毫升，此液约含Vc0．2毫克／毫升，置冰箱中保存。临用前当天进行标定。

Vc的标定：吸取Vc液5毫升于50毫升三角瓶中，加入2%草酸溶液10毫升，6%KI溶液0．5毫升，1%淀粉溶液5滴，用0．001NKIO₃标液滴定至溶液突变为浅蓝色为止(应耗用0．001NKIO₃溶液约为11毫升)，计算Vc的准确浓度：

式中：N——所用KIO₃溶液的当量浓度；

V₁——所用KIO₃溶液的量(毫升)；

V₂——所用Vc溶液的量(毫升)；

88——Vc的毫克当量(毫克)。

⑥2，6－二氯靛酸溶液：称取50毫克2，6－二氯靛酚钠(分析纯)溶于约200毫升含有52毫升NaHCO₃(分析纯)的温水中。使用前，待溶液恢复至室温后，用Vc标液标定其准确浓度。在冰箱中贮存时，每周须标定一次。

标定方法：吸取5毫升已标定的Vc标准液(含Vc约1毫克)于50毫升三角瓶中，加入2%草酸溶液10毫升，摇匀，用2，6－二氯靛酚溶液滴定至溶液呈浅红色，约在15秒内不褪色为止(应用染料溶液约10毫升)。计算每毫升染料溶液相当于Vc的毫克数，即滴定度T(应约为0．1毫克Vc／毫升)：

式中：C——所用Vc标准液的浓度(毫克／毫升)；

V₁——所用Vc标准液的量(毫升)；

V₂——所用染料溶液的量(毫升)。

测定步骤：

①样品处理：选取新鲜果实样品10～15个，洗净擦干，每个果实取中部纵横剖面各一薄片，用不锈钢刀迅速切碎，称取样品50～100．0克鲜样，将样品打成浆状。处理样品的整个过程应于10分钟内完成，以免Vc在空气中暴露过久而被氧化。用小烧杯称取10．x－30．x克浆状物(实际样品重为此重的1／2，应含还原型Vc1～5毫克)，洗入100毫升容量瓶中，用2%草酸溶液定容，若有泡沫可加工滴辛醇除去。过滤，若滤液色深，影响滴定终点的判定时，可加1～2勺白陶土脱色。若样液不易过滤，可用离心机分离。

对于多汁果实样品，如葡萄等，可用纱布压汁后棉花过滤，量取10～20毫升汁液，立即用2%草酸溶液定容100毫升。

对于干样品，直接称取1．000～4．00克(含Vc1～5毫克范围)放入研钵中，加入2%草酸溶液研磨成浆液，洗入100毫升容量瓶中，用2%草酸溶液定容。

含有还原性物质的样品，如含有较多Fe²⁺，可用8%醋酸溶液代替2%草酸溶液为浸提剂。

②样品的测定：用吸管吸取以上制取的无色滤液5．00～10．00毫升(使含Vc约0．2～1毫克范围)，放入50毫升三角瓶中，用棕色半微量滴定管中装的2，6－二氯靛酚标液滴定至浅红色，约在15秒内不褪色为终点。

同时作试剂空白试验。即吸取等量的浸提剂代替样品滤液用染料标液滴定(空白值通常约用0．08～0．10毫升染料液)。

结果计算：

式中：V——滴定样品液所用染料液量(毫升)；

V₀——空白试验所用染料液量(毫升)；

T——染料溶液的滴定度即Vc毫克／染料溶液量(毫升)；

W——滴定时样品液中样品重量(克)。

两次平行测定结果允许差：

样品中Vc(毫克／100克)

＜10

10～100

允许差(毫克／100克)

0．5

1．0

注意事项：

①偏磷酸是Vc最佳稳定剂，且具有沉淀蛋白质的作用，但其价格较贵，而且在室温下放置易转化为正磷酸盐，降低对Vc的稳定性。草酸廉价易得，有与偏磷酸相近的稳定性。而醋酸适于浸提含有Fe²⁺的样品。

②草酸不应置于日光下，以免产生过氧化物。当有催化剂(如有Cu²⁺)存在时，过氧化物能破坏Vc。

③2，6－二氯靛酚固体试剂有时含有分解产物，染料溶液长久贮存后也会生成分解产物，从而使滴定终点不敏锐。因此须在使用前检查。检查方法：取15毫升染料液加入过量的Vc溶液，若还原后的溶液带有颜色，表示此染料溶液已不能使用。

④使用白陶土时，要对每批新的白陶土测定对Vc的回收率。