梨树的离体快繁与脱毒技术

出处：按学科分类—农业科学 中国农业出版社《果树育苗手册》第159页（1592字）

1．适宜的培养基 V₁培养基：1／4MS大量元素和铁盐加1／10MS微量元素和1／10有机元素。

AS培养基：1／2MS大量元素和铁盐加1／10MS微量元素，肌醇和甘氨酸，其他有机元素同MS，再加250毫克／升水解乳蛋白。

2．适宜的取材、接种及初代培养 取冬贮的梨果实，用流水洗净，并用70%酒精消毒。取出种子，于无菌条件下剥去种皮，将种胚直播在V₁培养基上。1周后种胚长出小真叶，1个月形成胚苗。然后将苗的茎尖接在附加10毫克／升GA+1毫克／升BA的AS培养基上，于1700勒克斯光照下，每天光照10小时，温度26±2℃。

早春取一年生梨的顶梢，长约15厘米，浸泡在200毫克／升GA溶液中。置于26±2℃培养室内。经常加蒸馏水，保持溶液体积。浸泡7天后，换蒸馏水再浸泡11天，然后用75%酒精消毒半分钟，10%漂白粉液消毒10分钟，再用无菌水冲洗三遍。在解剖镜下剥离茎尖，取0．5毫米左右的茎尖，接种到AS+BA1．0毫克／升+GA10．0毫克／升上，26±2℃培养，光强3000勒克斯每天光照10小时。

若要脱毒，需把隐芽放在高倍镜下，剥离出生长锥，取0．1～0．3毫米茎尖。茎尖大一点培养容易，生长也快，但脱毒效果差一些。茎尖小，脱毒效果好，但不易培养。

3．生根和移栽 当无根苗长到2～3厘米时，用100毫克／升IBA浸泡25小时，转移到不含激素的ASH生根培养基上(1／2MS大量元素和铁盐，1／10微量元素和有机物，15克／升蔗糖，8克／升琼脂，pH5．8)，3周后生根。无根苗木质化程度太高成苗太幼嫩均不利于根的分化。

当根长到1．5厘米左右时，即可进行移栽。移栽一般用瓦盆较好，盆内用普通梨园土，上盖一平板玻璃，温度控制在15～20℃，1个月后去掉玻璃，按常规管理。

大量移栽可用周转箱，在周转箱内装上用水浸透的蛭石，约15厘米厚，将试管苗根部培养基洗净，栽入0．5厘米深。然后用塑料膜将周转箱盖起来，1个月后去掉塑料膜喷洒营养液进行根外施肥，温室温度5～20℃，湿度60%～70%最好。

4．梨脱毒方法

(1)恒热处理法 先准备好盆栽1年生杜梨砧木，春季取待脱毒的梨品种接穗切接于盆栽的杜梨砧木上，第二年2月中旬将盆栽苗移入温室，待萌动后，放入热处理箱内，将温度控制在37±1℃，处理28～30天。

(2)变温热处理法 在32℃和38℃两个变换温度下，每隔8小时换1次，处理6天。将上边两种热处理以后的芽，劈接或皮下接于盆栽杜梨实生砧木上，套上塑料袋保湿，待成活后移入田间鉴定。

(3)茎尖培养法 选好适宜梨品种茎尖培养的培养基后，从待脱毒接穗上，剥取0．1～0．3毫米的茎尖，接种在准备好的培养基上，待无根苗长到2厘米高时，准备脱毒鉴定。

(4)茎尖培养与热处理相结合脱毒法 通过茎尖培养法培养出无根苗后，放入37±1℃下处理28天，再切取0．5毫米左右的茎尖进行培养；或者先进行热处理后，取0．5毫米的茎尖进行培养。然后进行病毒鉴定。

经过上述4种方法脱毒处理后，应进行病毒检测。