组织培养法

出处：按学科分类—农业科学 中国农业出版社《果树育苗手册》第270页（1583字）

1．取材和灭菌 以一年生的枝上或根蘖苗上剪取新抽出的枣头，带回实验室用自来水冲洗干净，剪成带1～2个腋芽的茎段，于0．1%升汞中灭菌6～8分钟，用无菌水冲洗3～5次，剪去茎段两端药物浸渍部分接种到初代培养基上。

2．接种与培养 初代培养基为MS+BA2．0毫克／升+IBA0．4毫克／升，接种后10天左右叶腋开始出现不定芽，并抽出2～3个小枝，呈丛生状。1个月后这些小枝可长至3～4厘米，每小枝3～4节。将这些小枝按节剪成段，可作为继代繁殖材料。培养温度25～27℃，光照强度1000勒克斯为宜，光照周期8～24小时均可。

3．扩大培养 将初代培养新抽出的芽梢剪成1厘米左右的茎段，转接到继代培养基，经过一段时间的培养可形成许多丛生芽，将丛生芽反复转接，不断的增殖。继代培养基为MS+BA1．5毫克／升+IBA0．5毫克／升。继代培养约每30天一个周期。

4．生根培养 当继代培养的苗高长至4～7厘米时，可将丛生芽剪成1厘米左右带1～2个腋芽的茎段接到生根培养基上培养。7天左右，试管苗茎段腋芽开始萌发，同时茎段基部生出3～5条根；30～40天后芽梢生长量可达6～9厘米。生根培养基为H+BA0．01毫克／升+IBA0．1～1．0毫克／升+IAA0．1～10毫克／升。生根培养时其他条件与茎段培养相同，但光照时间应控制在12～16小时。

5．驯化及移栽 当试管苗在生根培养基上生长30～40天，苗高达6～9厘米，有3条以上根时进行移栽。先将装有试管苗的三角瓶置于温室内，温度25～30℃，遮荫条件下，炼苗2～3天。然后打开瓶盖炼苗3～4天，当试管苗叶色变绿，顶芽长出瓶口时，用镊子取出，洗净根部培养基，移到温室的苗床上，苗床上以田园土上覆3～5厘米厚的青沙作基质，株行距5厘米×10厘米。栽好后立即浇透水，扣上小拱棚保温、保湿。温度应保持在25～30℃，最高不得超过40℃；湿度应保持在95%～100%之间，光照强度1000～10000勒克斯之间。10天后当苗长出新根新芽时逐渐揭开小拱棚通风降温，增加光照。一个月后当根系从沙层伸入土壤开始吸收水分养分时，揭去小拱棚，进入正常管理。通过上述方法移栽，成活率可达96%以上。

组织培养还可以用于脱除枣疯病类菌原体(MLO)，主要方法简述如下：

1．茎尖分生组织培养法脱除MLO 秋冬季节从枣树基部剪取1～2年生根蘖，截成20厘米左右的小段。先用肥皂水涮净，然后用自来水洗净。以20～30根为一捆在常温下进行水培，待其发芽后，剪下嫩芽。将嫩芽用水冲洗干净，在超净工作台上，用70%～75%酒精消毒45秒，0．1%升汞添加2～3滴吐温一20消毒7～12分钟，在无菌水冲洗3～5次。在解剖镜下剖离0．5毫米长(带1～2个叶原基)的茎尖分生组织，接种到不含激素的MS培养基上，生长60天后转移到MS+BA1．0毫克／升+NAA0．1毫克／升培养基上生长。待有一定生长量后重新切割接种于相同培养基上。反复培养可脱去MLO。

2．热治疗与茎尖培养结合法脱除MLO 将上面材料(根蘖段)置于恒温水浴锅内进行温水处理，于45～50℃处理60分钟。处理后置于培养室内水培，每天换水1次，水温保持在25～40℃之间，室内相对湿度50%～70%。经水培10～12天后发生新芽，将经热处理后的新芽剪下与上述方法相同消毒，取茎尖分生组织培养，可脱去MLO。