形态学检查

出处：按学科分类—农业科学 中国农业出版社《兽医微生物实验诊断手册》第453页（1552字）

一、菌体形态检查

霉形体细胞多形态，其形态有丝状细胞，粗0．2～0．4μm，长可达100μm以上，有分支；球状细胞直径0．3～0．8μm；环状细胞直径可达10～20μm，猪肺炎霉形体呈球状、双球状、环状以及有浅染内部结构的大环状等极度的多形态(图19-1)。猪鼻霉形体变化较少，呈球状、豆点状或小环状等(图19-2)。

图19-1 猪肺炎霉形体菌体×1000倍

图19-2 猪鼻霉形体菌体×1500倍

丝状霉形体在对数期中呈丝状生长，继丝状转向链球状，最后胞浆收缩使链球断裂，释放出球形单体，在形态观察时应考虑，检查方法为：液体培养物经5000r／min离心30min，弃上清液，将沉淀物做成均匀悬液，吸一滴加至清洁玻璃片上，堆成薄层，干燥后用甲醇固定2～3min，用pH7．2的PBS将姬姆萨染液稀释20倍，染色3h，用pH7．2的PBS冲洗玻片，干后，丙酮脱色10s，干后在油镜下观察。

二、菌落形态检查

霉形体菌落较小(直径50～100μm)，通常由长入琼脂的不透明颗粒状中心和长在琼脂表面的透明外圈构成“煎荷包蛋”状(图19-3)。在营养贫乏，pH不适宜或培养基表面过于干燥时，不形成煎荷包蛋状，即只有向深部生长，而无薄层外圈。猪肺炎霉形体和肺霉形体，则在任何条件下均不出现“煎荷包蛋”状菌落(图19-4)。

图19-3 猪鼻霉形体菌落，呈现“煎荷包蛋”状，圆形、中央隆起

图19-4 猪肺炎霉形体菌落，无中央隆起

通常用低倍显微镜观察。如需染色常用狄乃(Dienes)氏染色法。必要时将其移种至无青霉素的培养基中可以排除细菌L型，菌落检查法如下。

1．不染色菌落

(1)用低倍镜找到疑似菌落，然后用高低镜检查结构。

(2)用铂耳轻刮菌落外周琼脂表面，应能刮去外周部分而留下长入琼脂的中心。

2．染色菌落法

(1)用平口刮刀切取一小块带有菌落的琼脂菌落面向上放在载玻片上。

(2)围绕琼脂块做一条凡士林——石蜡封条(凡士林2份，石蜡1份热融混合而成)。稍高于琼脂块。

(3)加数滴狄乃氏染色液，使完全盖住琼脂块。狄乃氏染色液为美蓝2．5g，天青Ⅱ号1．25g，麦芽糖10g，碳酸氢钠0．25g，苯甲酸0．2g，硫柳汞0．01g，水100ml配成贮藏液，将贮藏液用水稀释成3%，通过孔径220nm的滤膜过滤即为使用液。

(4)加盖玻片至凡士林封条上，使尽量靠近而不接触琼脂块，勿使有气泡。

(5)在低倍或高倍镜下观察。霉形体菌落染成蓝色，细菌和真菌菌落能还原美蓝而无色；霉形体菌落多数保持“煎荷包蛋”状，而细菌菌落通常在染色液中散开。

3．区别细菌L型 用平口刮刀切取约1cm²带有疑似菌落的琼脂块，菌落面朝下放在不含青霉素的新鲜琼脂培养基上，用L形玻棒推移接种。培养后镜检，L型则回复为细菌原型，产生典型的细菌菌落。