细胞培养的不同方法

出处：按学科分类—农业科学 中国农业出版社《兽医微生物实验诊断手册》第563页（1424字）

1．静置培养 细胞在37℃培养时静置不动，此法应用最为普遍。培养液太少则细胞营养不够，太多则氧气交换不充分，一般培养液的深度约为2～3mm。

2．微量细胞培养 这也是静置培养的一种，它在聚丙烯等塑料微量培养板的平底孔中培养，孔径约1cm，面积很小，材料节省。这种培养板密封比较困难，有些用透明塑料胶带密封，但通常放置于CO₂培养箱中培养。或者pH的调节不用NaHCO₃而用HEPES。多数塑料培养板不能耐高压蒸气灭菌或煮沸，国外将板装在密封袋内用γ射线照射灭菌，国内也开始应用。作者将板浸泡于70%酒精中，临用前用灭菌水淋洗；或者将板在紫外线下照射2～3h效果也佳。

3．转管培养 静置培养细胞生长面很小，不能充分利用容器的四壁，因此在大量繁殖病毒(如生物制品厂生产疫苗)时，就采用转管的方法，使细胞在容器的整个内壁都生长。有些病毒如呼肠孤病毒用转管培养时生长更好。在普通实验室中通常自制小型转鼓，国内也有商品出售。转鼓用电动机带动，并能调节转速，在6～12r／h细胞都易贴附。作者用500ml盐水瓶每瓶装50ml细胞悬液，细胞生长很满意。

4．悬浮培养 正常的二倍体细胞必须贴附在玻面才能生长繁殖，传代细胞系中有些也具这种特性，但也有些异倍体细胞的分裂繁殖不需要贴附，它们可以应用悬浮培养。

(1)将细胞悬浮于不含Mg⁺⁺和Ca⁺⁺的生长液中，细胞浓度约为1～3×10⁵／ml。

(2)培养瓶装50%容量的细胞悬液，瓶内加一根磁棒，瓶塞通2根玻管，1根收获细胞悬液，另一根注加新培养液。

(3)将瓶放在电磁搅拌器上以2r／min的速度转动，以防细胞沉淀。

(4)每天或隔天(生长缓慢的细胞)吸出细胞悬液一半，同时注加同量培养液。

5．微载体培养微载体是带有阳电荷的小颗粒，直径多数为150～300μm，密度约为1～1．05。国外很多厂商有商品出售，如SephadexA和DEAE-SephadexA等。

这种方法结合了静置和悬浮培养两种方法的特点，细胞贴附在微载体上生长，微载体在培养液内悬浮。目前此法的生产成本比较高，但仍吸引了很多人的注意，原因是它的生产效率很高，如1g直径200／μm的微载体具有0．6m2的面积，相当于直径9cm的平皿100个。

(1)1L玻瓶中加微载体1～2g，接种500ml细胞悬液(浓度为50000／ml)。用HEPES和NaHCO₃使pH保持稳定，或者单用NaHCO₃但pH降低时随时补加。

(2)转管培养(12r／h)使细胞贴附在微载体上。

(3)培养5～7天细胞量很多时，将瓶静置，使微载体下沉，吸去培养液，以0．25%胰蛋白酶将细胞解脱收获。或者再加更多新培养液和微载体扩大生产。