疱疹病毒甲亚科
出处：按学科分类—农业科学 中国农业出版社《兽医微生物实验诊断手册》第622页（10643字）
本亚科病毒常潜伏于神经节。它们的宿主范围有的很宽，有的甚窄。在细胞培养中能迅速感染敏感细胞，引起大量细胞破坏。
一、牛传染性鼻气管炎病毒(Infectious boyine rhinotracheitis virus)
本病毒主要引起牛传染性鼻气管炎。也引起犊牛结膜炎、脑膜炎，母牛传染性脓疱性阴唇阴道炎、流产，公牛脓疱性龟头包皮炎、脓疱性结膜炎或脑炎，猪传染性脓疱性阴道炎以及兔脑膜炎等。
(一)样品采集 根据临床症状采集适当样品。鼻气管炎时采取发热期的鼻洗液，鼻液和眼结膜囊；阴唇阴道炎时采取阴道的分泌液；伴有脑膜炎时，采取脑组织；流产胎儿时，采取胎儿胸水、心包液、心血及肺组织等。样品应即放入运输液中，冷藏保存，迅速检验。
(二)病毒分离 一般应用细胞培养。最常用牛肾和牛睾丸原代或次代细胞，也可用牛肾(MDBK)和牛气管(BDC)细胞系，猪、山羊、绵羊、兔和马的肾细胞，以及兔睾丸细胞、人羊膜细胞和牛淋巴结细胞。经常规方法接种病料24～30h后，细胞可出现典型病变，开始局灶性细胞变圆、变暗，逐渐向四周扩散，中心部位细胞脱落。用苏木紫—伊红染色，镜检，可在细胞病灶周围看到少量合胞体和大量嗜酸性核内包涵体，包涵体呈圆或椭圆形，外围有一圈透明晕。
(三)血清学试验
1．中和试验 此法可用以鉴定分离的病毒。标准阳性血清可用兔、豚鼠或小公牛制备，通常用106TCID50的标准毒株剂量静脉或肌肉注射，每周一次，连续2～6次，最后一次经7天后采集血清。将阳性血清与适当稀释(10-3)的被检病毒分离物等体积混合，37℃作用1h后，接种牛肾原代或次代细胞，培养3—5天后判定结果。
2．荧光抗体试验 用直接法或间接法均能检出。病畜脾、扁桃体等多种组织压印片中及细胞培养中的病毒抗原。
酶标和放射免疫测定也可用于检验病毒抗原。间接血凝、补体结合和免疫扩散等试验则可用于检验病畜血清中的抗体。
二、牛乳头炎病毒(Bovine mammillitis virus)
(一)样品采集 采取病中乳头痂皮、疱疹皮肤、健病交界处皮肤，病变区组织渗出物，放入保存液中，保存于-20℃冰箱。
(二)病毒分离
1．细胞培养 常用犊牛肾或乳仓鼠肾细胞，病毒引起合胞体和核内包涵体等明显的细胞病变，也可用牛淋巴结、牛结膜、牛甲状腺、羔羊睾丸、猪肾、猫肾和猫肺细胞等。培养方法如下。
(1)将病料及少量保存液充分研碎，pH7．4Hanks液适当稀释，3000r／min离心15min，上清液经孔径0．3μm的滤器过滤。
(2)取滤液接种单层细胞，37℃吸附1h后补充适当营养液，培养观察10天。
(3)若不出现细胞病变则冻融3次，进行育传。将病变规律的细胞培养物置-20℃中保存供鉴定。
2．动物试验 用本病毒接种犊牛，6天后可在接种部出现隆起的炎性肿块，继而表面出现溃疡，病变在一周内愈合。接种乳小鼠、大鼠和仓鼠可能引起出疹、发育不良、甚至死亡。
(三)血清学试验 患牛很快产生中和抗体，可在犊牛肾或乳仓鼠肾细胞培养中以中和试验检验。上述分离的病毒也可用中和试验和补体结合试验鉴定。
三、牛疱疹病毒4型(Bovine herpesvirus type 4)
本病毒引起小牛的隐性，轻微或急性呼吸道感染，当联合感染多杀性巴氏杆菌时病情严重。有的也发生肺炎和结膜炎。
采集病牛鼻内分泌物接种牛胚气管或牛鼻甲细胞培养，从感染细胞可检出A型核内包涵体。
本病毒的免疫原性弱，感染牛血清中抗体滴度低，用间接荧光抗体、免疫电镜等方法能检出特异性抗体。
四、马鼻肺炎病毒(Eqine rhinopneumonitis virus)
又名马流产病毒，它除具有疱疹病毒的一般形态外，还有另一特征，即在感染细胞的超薄切片中，看到病毒芯髓呈十字形。病毒不能在宿主体内长久生存。补体结合和免疫扩散试验中它与牛鼻气管炎病毒有交叉反应，但中和试验则无。本病毒能凝集马的红细胞。它主要引起马原发性鼻肺炎和妊马的继发性流产。
(一)样品采集 马鼻肺炎时最好采集发热期的鼻洗液，或用棉拭子取鼻分泌物，也可采病马血液、鼻粘膜、鼻甲、脾和肾。流产胎儿则最好采取肺，其次为肝、脾和胸腺。
(二)病毒分离
1．细胞培养 最好用马肾原代细胞，其次用乳仓鼠和猪肾细胞，也可用牛、羊、犬、猫、兔和猴等的肾原代细胞及鸡胚成纤维细胞。本病毒在马肾细胞培养中的细胞病变特征是感染细胞变圆和膨大，用HE染色可见合胞体和A型核内包涵体。用甲基纤维素覆盖单层细胞培养，培养6天后可出现直径4mm左右的空斑。在一周龄乳仓鼠肾细胞培养中，多数毒株在初代即可出现细胞病变，少数在第二代时出现，随着代次增加，出现病变的时间明显缩短，接种后2～3天即开始出现，3～5天达高峰。
2．鸡胚接种 新分离毒株不适应于鸡胚，用乳仓鼠肾分离的毒株和10天龄鸡胚交替通过，经绒尿膜、羊膜或卵黄囊接种可逐渐适应，在内胚层和中胚层细胞中可检出核内包涵体。
3．动物试验 用20%的马胚肾细胞培养物腹腔内接种2日龄仓鼠，18—24h内可引起致死性肝炎，在肝提取液和血清中可获得高滴度的病毒。本病毒也能感染成年仓鼠和乳小鼠，引起死亡，感染豚鼠引起上呼吸道卡他性炎症，感染妊娠豚鼠则诱发流产。
(三)血清学试验
1．荧光抗体试验 可检出感染细胞中的病毒抗原。
(1)用自然感染马的免疫血清，或兔免疫血清，按常规制备荧光抗体。
(2)将病料接种装有盖玻片的乳仓鼠肾或乳兔肾细胞培养，荧光抗体染色后镜检，感染细胞核或整个细胞可见亮绿色特异荧光。
(3)采取流产胎儿肺、肝、脾、肾及心制成压印片或冰冻切片，丙酮固定后，染色，镜检及判定与细胞培养相同。
2．中和试验 可检出病毒的特异性抗体。用微量细胞培养法；细胞长成单层后，每孔加入经37℃90min作用的病毒—血清混合液0．1ml，每个血清稀释度加4孔，加入维持液后置CO2培养箱内，或用胶布密封，37℃培养一周，逐日观察记录CPE。
本病毒与同一亚科的马交媾疹病毒不呈交叉反应，用交叉中和试验可鉴别。
3．补体结合试验 用以检测免疫血清的效价。
(1)用本病毒接种细胞，当大部分细胞出现病变时收获，放低温冰箱冻融3次，经3000r／min离心20min，取上清液供作抗原，
(2)被检马血清经56℃30min灭活处理，从1∶4～1∶128作倍比稀释，加入抗原和补体后置4℃过夜。
(3)加致敏红细胞，37℃水浴感作30min后判定，发生50%溶血的血清最高稀释度为该血清的效价。
此外，也可采用免疫扩散试验、血凝和血凝抑制试验、空斑减数试验等检测抗体。
五、马交媾疹病毒(Equine coital exanthema Virus)
本病毒通过交配传染，引起马生殖器官粘膜，会阴部皮肤，阴茎包皮等发生丘疹、脓疱和溃疡。
(一)样品采集 采取患马阴茎、包皮、会阴部病变组织，或用棉拭采取阴道粘膜分泌物。
(二)病毒分离 将病料接种马肾细胞培养，病毒增殖快，细胞形成大合胞体和核内包涵体，在空斑试验中可形成直径10mm的空斑。
(三)血清学试验 中和试验可检测患马血清抗体。
六、伪狂犬病病毒(Pseudorabies Virus)
本病毒常感染猪、牛、羊、狗和猫。
(一)样品采集 最好采集病死猪或病猪发热期的脑组织(中脑，脑桥和延脑)及扁桃体。亚临床感染或康复猪，可收集鼻洗液，或口咽部棉拭子样品。需保存的样品应剪成小块，放入50%甘油盐水中冷藏。
(二)病毒分离
1．细胞培养 最好用猪肾传代细胞以及猪、牛、兔的原代细胞。也可用羊和犬的肾细胞，豚鼠和牛的睾丸细胞，鸡胚和小鼠的成纤维细胞和Hela细胞等。
(1)将病料悬液的离心上清液接种单层细胞。在甘油盐水中冷冻保存的样品须先洗去甘油。
(2)逐日观察，多数在接种48小时前后出现明显病变。通常有两种类型，一种是感染细胞质内很快出现颗粒，细胞变圆、膨大，形成一堆堆折光力强的分散的细胞病灶。另一种是感染细胞相互融合，形成轮廓不清的合胞体，融合迅速扩展，进一步形成大合胞团。细胞病变明显时，维持液中的病毒含量高且恒定。
(3)出现病变的细胞培养物用酸性固定液固定，苏木紫—伊红染色，可见典型的嗜酸性核内包涵体，在合胞体内有时尚可见嗜碱性核内包涵体。
兔肾和猪肾细胞最适合做本病毒的空斑试验，依据空斑形状和大小可鉴别强、弱毒株，强毒株不规则且小，弱毒株较大，弱毒疫苗株最大，直径可达8～10nm。
2．鸡胚接种 病料经绒尿膜接种9～10天龄鸡胚，3～4天后出现中等大小的白色痘疱，强毒株可严重侵袭鸡胚神经系统，致死鸡胚。死胚呈弥漫性出血和水肿，头盖骨突出，皮肤出血。感染细胞中可检出核内包涵体。经尿囊腔和卵黄囊接种，本病毒也能增殖和传代。
3．动物试验 兔、猫、犬对本病毒很易感。将病料悬液1～2ml接种于胁部或腹侧皮下，多数在36～48h后接种部出现奇痒，动物自行啃咬，以至脱毛、破皮、出血，继而四肢麻痹，动物于症状出现后数小时死亡。豚鼠和大鼠的易感性较低，皮下接种含毒量要增加100～1000倍豚鼠才会死亡。用10%病猪脑悬液，脑内接种8～12g断乳小鼠，可引起有规律的死亡，但有些品种抵抗力甚强。
(三)血清学试验
1．中和试验 通常在细胞培养中进行，用于检查猪血清内的特异性抗体。
也可用空斑减数试验检测血清中和效价，尚可试用琼脂扩散试验检验病猪血清中的沉淀抗体。
2．荧光抗体试验 检验细胞培养物中的病毒。
(1)将病料上清液，接种PK-15细胞培养(装有盖玻片)。
(2)吸附60min后用Earle氏液洗一次，加入维持液，继续培养16～24h。
(3)取出盖玻片，加荧光抗体染色、镜检。
七、禽传染性喉气管炎病毒(Avian infectious laryngotracheitis virus)
本病毒体积较大，直径150～400nm。它引起鸡的急性上呼吸道感染，也偶尔感染野鸡。人工经鼻内、眼内、气管内接种也能感染火鸡、鸽和鸭。
(一)样品采集 采取病鸡的气管和肺组织，也可用棉拭子从急性病鸡或临床症状消失后的带毒鸡气管采取粘液，将样品投入运输液中，保存于-70℃冰箱。
(二)病毒分离
1．细胞培养 用鸡胚成纤维细胞、呼吸道上皮细胞或肺、肾细胞。可将病料直接接种细胞培养分离病毒。若用感染鸡胚的绒尿膜与尿囊液混合物接种则更易分离。接种后1天或3～5天可出现典型细胞病变，细胞局灶性圆缩，形成合胞体，直至脱落。在感染细胞中可检出典型的核内包涵体。
2．鸡胚接种 将病料经绒尿膜接种10日龄鸡胚，鸡胚多在3～10天死亡，初代可能不死，盲传后才逐渐出现规律死亡。绒尿膜可见水肿和直径约4～5mm、中心低陷、边缘隆起的灰白色痘疱样坏死病灶。鸡胚接种后36～48h，在绒尿膜细胞中可检出嗜酸性核内包涵体。尿囊腔接种时在绒尿膜内层表面、鸡胚气管和支气管内，可见炎症和充血为主的特征性病变。
3．动物试验 将病料气管内接种易感小鸡，48h内发生炎症，随后坏死，4～5天呼吸道闭塞。经鼻内或点眼接种也能引起典型病症。将性成熟前的鸡腔上囊粘膜擦伤，涂上病料悬液，第2天可见腔上囊明显肿胀，第4～5天达高峰，鸡不出现呼吸道症状，也不会死亡，但10～20天后能抵抗强毒的攻击。
(三)血清学试验
1．荧光抗体技术 用于检验病料中的病毒。将病鸡喉气管粘膜上皮涂片或切片，加荧光抗体染色，镜检。
2．中和试验
(1)鉴定分离的病毒 用标准强毒株制备高免血清，以鸡胚或细胞培养进行病毒中和试验。弱毒株常不能被中和，所以应同时进行病毒一般特性和形态等检验，以其他特性作出鉴定。
(2)检验鸡血清中的特异性抗体；将鸡血清与连续10倍稀释的病毒等体积混合，室温中作用30min，经绒尿膜接种鸡胚，孵育6天后，检查绒尿膜上的痘疱病变，计算EID50。
中和试验也可在鸡肾细胞培养中进行，计算TCID5。。也可用琼脂覆盖培养作空斑减数试验。免疫扩散试验也能检验鸡血清中的抗体。中和试验和免疫扩散试验对鸡痘、鸡新城疫和其他呼吸道传染病都不发生交叉反应，可以区别。
八、鸭瘟病毒(Duck plague virus)
自然宿主为雁科禽类，主要为鸭和野鸭，近年来也常发生鹅的大批感染死亡。
(一)样品采集 病毒大量存在于病鸭体内各组织、脏器、分泌物和粪便中，通常采取病鸭或死鸭的血液、肝、脾或肾。
(二)病毒分离
1．细胞培养 将病料按常规方法处理、接种于鸭胚、鹅胚或鸡胚成纤维细胞培养中，2～4天后能检出核内包涵体，第6代起出现明显的细胞病变，连续继代病毒毒力逐渐减弱。
2。鸭胚接种 将病料0．2ml接种于11～13天龄鸭胚绒尿膜或尿囊腔，37℃孵育3～5天多数鸭胚死亡，胚体皮肤广泛充血、出血，肝出现特征性的灰白色针头大坏死灶。病毒经鸭胚传10代后可适应于13～15天龄的鹅胚；也能适应于9～10天龄鸡胚，鸡胚多数在3～5天死亡，病变与鸭胚相似。
(三)血清学试验 中和试验是鉴定鸭瘟病毒的基本方法，应用鸭胚或鸭胚成纤维细胞培养物，按常规采用病毒稀释法，血清稀释法或空斑减数试验法进行。荧光抗体和免疫扩散也可用于病毒鉴定。
九、犬疱疹病毒(Canine herpesvirus)
本病毒的有些类核体与马鼻肺炎病毒相似，呈十字形或星形。它可引起幼犬急性致死性感染。
(一)样品采集 取病、死幼犬的肾、肝、肺和脾，大病犬的鼻、口咽和阴道分泌物。不立即检验的样品加50%甘油盐水，保存于-70℃。
(二)病毒分离 细胞培养常用犬肾或犬肺原代细胞培养，接种病料后培养于35～37℃，病料含毒量高时，24h内可出现细胞病变，病毒量低时推迟到7天。细胞病变特征为形成分散、明显的病灶，细胞变圆，折光性变强。若无细胞病变，要盲传一次。原代或次代犬肾或犬肺细胞培养常被本病毒污染，所以应留5～10%不接种对照管。感染的单层细胞，在琼脂覆盖层下可形成直径1．5～2。0mm的小空斑。
(三)血清学试验
1．中和试验 测定犬血清中的中和抗体。
(1)把待检血清灭能并作2或4倍连续稀释。
(2)各取0．1ml与等量(约含100个TCID50)的标准病毒液混合，室温中作用1h后接种犬肾细胞培养，每管0．2ml。
(3)置36℃中培养6天，观察，判定。同时设参考血清和病毒对照。
中和试验也可用空斑试验进行。
2．荧光抗体技术 检验病料或细胞培养中的病毒抗原，是一种准确快速的方法。
十、猫鼻气管炎病毒(Feline rhinotracheitis virus)
猫鼻气管炎是一种高度接触性传染病，主要侵害仔猫，发病率可达100%，死亡率可达50%。
(一)样品采集 采取病猫的肝、肺、脾、肾、唾液腺和脑，也可用棉拭在鼻咽粘膜或眼结膜采样。
(二)病毒分离
1．细胞培养 采用猫肾、肺、睾丸细胞和兔肾细胞培养，接种病料后24h可出现局灶性细胞变圆，细胞质呈线状，形成小合胞体。细胞病变发展快，36～48h单层细胞全部脱落。感染细胞可检出圆形或椭圆形嗜酸性核内包涵体，外有一圈透明晕。病毒与细胞结合，培养液中病毒含量不高。10%的胎牛血清能提高病毒的稳定性，分离的病毒应保存于-60℃以下。
2．动物试验 猫是唯一的易感动物，未接触过本病毒的幼猫更为易感。通过鼻内、眼内、皮下、肌肉、静脉接种，48小时内可出现上呼吸道症状和体温升高，并可维持6～10天。静脉反复注射高浓度的病毒给兔和羊可获得高免血清。
(三)血清学试验
1．中和试验 检测猫血清中抗体。将待检血清作2倍连续稀释，分别与约含100个TCID50的病毒液作用，然后接种猫肾细胞培养，观察5～7天，记录结果。
2．荧光抗体技术 可快速、准确检出涂片或切片中的病毒抗原。
十一、恒河猴B病毒(B virus of rhenus monkey)
本病毒自然感染恒河猴等一般不表现症状，动物园中拥挤的猴群常在舌、唇、皮肤出现水泡，变成溃疡，感染人则引起死亡。
(一)样品采集 采取隐性感染动物，病、死动物和人的脑、脊髓、脾、唾液等，于-70℃中或在50%甘油中4℃贮藏。
(二)病毒分离
1．细胞培养 病料接种兔肾、人、猴等细胞培养产生合胞体和核内包涵体。
2．鸡胚接种 接种鸡胚绒尿膜，产生细小不透明的痘疱。
3．动物试验 任何途径接种兔，10～12天后发生皮肤坏死，剧烈抓痒，最后因脑炎死亡。乳鼠、豚鼠及1日龄雏鸡均易感染。
(三)血清学试验 可用中和试验和补体结合试验检测猴血清抗体，但意义不大，因它与其他一些猴病毒有交叉反应。
十二、狨疱疹病毒(Marmoset herpesvitus)
本病毒自然感染狨和枭猴不出现症状，鼠猴则出现唇和口腔疱疹。
(一)样品采集 采取病变部位痂皮，水疱液或喉棉拭样品。
(二)病毒分离
1．细胞培养 采用狨、兔和人的细胞培养，感染细胞内形成A型核内包涵体。
2．鸡胚接种 经绒尿膜接种鸡胚，可在膜上形成痘疱样病变。
3．动物试验 脑内接种兔和小鼠，腹腔接种乳鼠和仓鼠均能致病。
十三、其他猿猴疱疹病毒
(一)猕猴疱疹病毒(SA8) 可采取猕猴肾作样品，用兔、猴肾和人细胞培养分离病毒，皮下接种兔和豚鼠可引起局部病变，兔可能发生致死性脑炎。
(二)红猴疱疹病毒(Patas herpesvirus) 本病毒可在猴和人细胞培养中增殖，产生合胞体和核内包涵体。
(三)鼠猴疱疹病毒(Herpesvirus saimiri) 本病毒自然感染鼠猴不表现症状。可用枭猴、狨和人的细胞培养分离。接种枭猴和狨可产生恶性淋巴瘤，接种后13～18天死亡，可见到淋巴细胞增生和网状细胞侵入内脏。接种兔也可诱发淋巴瘤。
十四、鸽疱疹病毒(Pigeon herpesvirus)
本病毒能感染年轻鸽引起包涵体病。
(一)样品采集 采取病鸽肝、脾、喉拭子、喉、气管和肺。
(二)病毒分离
1．细胞培养 病料可接种鸡胚成纤维细胞、鸡胚肾、鸡胚肝、小鸡肾和鸽肾细胞培养，细胞病变为细胞变圆、折光性变强，有的可见许多巨大合胞体。
2．鸡胚接种 将病料制成10%悬液，接种于12天龄鸡胚绒尿膜上，鸡胚约于4～5天死亡，绒尿膜上可见直径约1mm的乳白色痘疱。在绒尿膜的外胚层细胞中可检出嗜酸性或嗜碱性核内包涵体。鸡胚肝中可见坏死灶。
本病毒尚可感染鸡胚绒尿膜中胚层细胞，这可与传染性喉气管炎病毒相区别。
(三)血清学试验
1．荧光抗体技术 用间接荧光抗体法可检出患鸽肝和胰腺细胞中的病毒，病毒均匀分布于细胞核内和核边缘。
2．中和试验 用特异抗血清，在鸡胚或细胞培养中进行交叉中和试验，可区分本病毒与传染性喉气管炎病毒。
3．补体结合试验 可检测病鸽血清的特异性抗体。
十五、其他禽类疱疹病毒
鹦鹉疱疹病毒(Parrot herpesvirus)、猫头鹰疱疹病毒(Owlherpesvirus)和鸬鹚疱疹病毒(Cormorant herpesvirus)各引起相应禽类感染。接种鸡胚绒尿膜或尿囊腔都能生长，在绒尿膜上产生痘疱，引起胚胎死亡。感染细胞内能检出A型核内包涵体。