靛酚蓝比色法

出处：按学科分类—农业科学 农业出版社《土壤农化分析手册》第258页（1444字）

1．适用范围及原理 土壤浸出液中的NH⁺₄－N在强碱性介质中与次氯酸盐和苯酚作用，生成水溶性染料靛酚蓝，溶液的蓝色很稳定，在0．05－0．5ppmN范围内，其深浅与NH₄⁺－N含量成正比，可用比色法测定。反应过程可用下列各式表示：

反应体系的pH应为10．5－11．7之间。硝普钠〔硝基铁氰化钠，或称亚硝酰基五氰基合铁(Ⅲ)酸钠，Na₂Fe(CN)₅NO〕是此反应的催化剂，能加速显色，增强蓝色和蓝色的稳定性。在20℃左右室温时一般须放置1h后比色，完全显色约需2－3h。生成的蓝色很稳定，24h内吸收值无显着变化。

2．试剂配制

(1)酚溶液：10g苯酚和100mg硝普钠〔Na₂Fe(CN)₅NO·2H₂O〕溶于1L蒸馏水中。此试剂不稳定，须贮于暗色瓶，存放在4℃冰箱中，用时须温热至室温。注意硝普钠有剧毒!

(2)次氯酸钠碱性溶液：称量10gNaOH，7．06gNa₂HPO₄·7H₂O，31．8gNa₃PO₄·12H₂O和10ml5．25%NaOCl(即含有效氯5%的漂白剂溶液)溶于1L水中。此试剂应与酚溶液同样保存。

(3)掩蔽剂：40%(W／V)酒石酸钾钠溶液与10%(W／V)EDTA二钠盐溶液等体积混合。每100ml混合液中加0．5ml10NNaOH溶液，即得清亮的掩蔽剂。

(4)5ppmNH₄⁺－N标准溶液：称0．4717g烘干的(NH₄)₂SO₄(二级纯)溶于水中。定容至1L。此为100ppmNH₄⁺－N贮备标准液。测定当天将此液用水准确稀释20倍(例如5ml稀释至100ml)，即为5ppmNH⁺4－N标准溶液。

3．测定步骤 吸取铵态氮测定中蒸馏法的土壤2NKCl浸出液2－10ml(含NH⁺₄－N2－25μg)，放入50ml容量瓶中，用浸提剂(2NKCl)补足至总体积为10ml，然后用水稀释至约30ml，依次加入5ml酚溶液和5ml次氯酸钠碱性溶液，摇匀，在20℃左右室温下放置1h后，加入1ml掩蔽剂以溶解可能生成的沉淀物，然后用水定容。用1cm比色槽在625nm波长处(或红色滤光片)进行光电比色，用空白试验溶液(只有同量试剂但无土壤浸出液的空白溶液)调节仪器吸收值的零点。

工作曲线的绘制，分别吸取5ppmNH₄⁺－N标准溶液0，0．5，1，2，3，4，5ml放入50ml容量瓶中，各加2NKCl浸提剂10ml，同上显色和测定吸收值后绘制工作曲线。各瓶标准液的浓度相应地为0，0．05，0．1，0．2，0．3，0．4，0．5ppmNH₄⁺－N。

4．结果计算

5．注释

待测液中如有干扰的金属离子，可用掩蔽剂掩蔽。掩蔽剂应在显色后加入。如加入过早，会使显色反应很慢，蓝色偏低；加入过晚，则生成的氢氧化物沉淀可能老化而不易溶解。在20℃左右时放置1h即可加掩蔽剂。