酚二磺酸比色法

出处：按学科分类—农业科学 农业出版社《土壤农化分析手册》第260页（2223字）

1．适用范围 本法具有较高的灵敏度，待测液中亚硝酸根在1mg／L和C1^－在30mg／L以下时，用此法对测定无影响。此法测定硝态氮的范围为0．1－2ppm。

2．试剂配制

(1)酚二磺酸：称取纯酚(石灰酸)25g，于500ml三角瓶中，以150ml纯浓H₂SO₄溶解，再加入75ml发烟硫酸经沸水浴加热2h，可得酚二磺酸溶液贮于棕色瓶中，使用时须注意其强烈的腐蚀性，如无发烟硫酸，可用25g酚加225ml浓H₂SO₄，在沸水浴上加热6h配成。

(2)1∶1氢氧化铵。

(3)硝态氮标准溶液：准确称取分析纯KNO₃0．7218g溶于水中，定容至1L。此溶液每ml含。将此溶液稀释10倍，即每毫升含NO3－N0．01mg(10ppm)。

(4)0．02N硫酸铜浸提剂：将1N硫酸铜溶液(1L水中溶有125gCuSO₄·5H₂O)200ml和0．6%硫酸银溶液(1L水中溶有6gAg₂SO₄)1L混合，用水稀释至10L。

(5)氧化钙和碳酸镁(固体)。

(6)无硝酸盐的活性炭。

3．测定步骤 称取相当于干土50．0g的田间新鲜土样(有机质含量高者称25g)于500ml三角瓶中，加入0．02N疏酸铜浸提剂250ml，振荡10min后静置。将上部澄清液(约125ml)倾入另一三角瓶中，并向其中加入0．2g氧化钙，以沉淀过剩的铜离子，同时加入0．5g碳酸镁，以沉淀过剩的银离子，然后振荡5min，用干滤纸过滤，若滤液因含有机质而有颜色，须同时加1勺无硝酸盐的活性炭振荡过滤。

吸取滤液50ml(硝态氮含量不低于0．01mg)于瓷蒸发皿中，在水浴上蒸发至干，冷却后迅速加1ml酚二磺酸于干残渣上，并用圆头玻棒搅动，使残渣与溶液完全接触，作用10min后，加水约15ml，用玻棒搅拌溶液，直至全部残渣溶解，待蒸发皿冷却后，缓慢加入1∶1NH₄OH至溶液呈现黄色，再加NH₄OH3ml。将溶液无损地移入100ml容量瓶中，加水定容至刻度并摇匀。在分光光度计上用波长420nm进行比色。

硝态氮标准曲线的绘制：分别吸取10ppm硝态氮标准液0、2、5、10、15ml于瓷蒸发皿中，在水浴上蒸干，与待测液相同操作进行显色、比色，以NO₃－N浓度(ppm)为横座标，吸收值为纵座标，在方格纸上绘成标准曲线。其标准系列浓度为0、0．2、0．5、1．0、1．5ppmNO₃－N。

4．结果计算

式中：ppm——从标准曲线查得的NO₃－N的ppm数；

1000——将微克换算成毫克；

100——换算成每百克样品中硝态氮毫克数。

5．注释

①硝酸根不为土壤胶体所吸附，且易溶于水，很易随水在土壤内部移动，在土壤剖面上下层中移动频繁，因此测定硝态氮时应注意采样部位，即不仅要采取表层土壤，而且要采集心土和底土，采样深度可达40、60至120cm，有些试验认为：分析全根层的硝态氮含量能更好地反映土壤的供氮水平，和表层土壤比较，则全根层的硝态氮含量与生物反应之间有更好的相关性。

②氯离子对本法有干扰，可用硫酸银加以消除。若土壤中氯离子低于1mg／100g土时，则提取时可不加硫酸银(可改用单独硫酸铜提取)，因50ml提取液中含有0．06%硫酸银，能沉淀0．04%的氯离子。若含氯量小于0．04%时，可不必补加硫酸银固体，若大于0．04%时，必须补加硫酸银固体，以沉淀氯离子。硫酸银固体的加入量，可按1%氯离子加2．25g的比例计算。同时因银离子不能过剩太多(对测定同样有干扰)，少量的银离子则可用碳酸镁加以沉淀消除。

③如果浸出液中含铵盐较多，可在蒸发以前加入少量3%氢氧化钾溶液，以消除铵盐对结果的负误差。

④待测液中亚硝酸根如超过1mg／L时，可用尿素加以破坏。一般每10ml待测液中加入20mg尿素，并放置过夜，以破坏亚硝酸根。

⑤检查亚硝酸根方法：取5滴待测液于白瓷板上，加0．1g亚硝酸试粉，用玻棒搅拌后放置10min，如有红色出现，即有1mg／L亚硝酸根存在，如果红色浅或无色，则可省去破坏亚硝酸根的手续。

⑥滤液若因有机质而带色，宜用活性炭去除，用H₂O₂处理，会使最后的溶液的颜色反常。