比色法

出处：按学科分类—农业科学 农业出版社《土壤农化分析手册》第626页（1642字）

(一)适用范围 本法为间接测定法。即将样品中果胶水解为半乳糖醛酸，在浓硫酸中与咔唑试剂呈色而可比色定量。由半乳糖醛酸百分含量换算成果胶百分含量。本法适测半乳糖醛酸范围为10－100mg／ml。

(二)试剂配制

1．0．15%咔唑乙醇溶液 称取咔唑〔(C₆H₄)₂·NH又名亚氨基二苯或9-氮杂芴〕0．15g，溶于100ml 99%乙醇溶液中。

2．半乳糖醛酸标准液 称取0．1000g半乳糖醛酸(C₆H₁0O₇)溶于水定容至1L，此液浓度为100μg／ml。

3．1N硫酸。

(三)测定步骤

1．工作曲线绘制 吸取100μg／ml半乳糖醛酸标准液0，5．0，12．5，25，37．5，50ml于6个50ml容量瓶中，定容。即为0，10，25，50，75，100μg／ml半乳糖醛酸的系列标准液。各吸取1．00ml于6支试管中，加浓硫酸6ml，在沸水浴中加热20min。取出冷却至室温后，各加入0．2ml咔唑乙醇溶液，摇匀。在暗处放置2h，在530nm波长处用2cm比色杯测读吸光度，绘制工作曲线。

2．样品测定 称取均匀风干样品1．00g，置150ml烧瓶中，加入70－80%乙醇液50ml，在70℃水浴上回流加热30－40min，以除去糖分及其他物质。用滤纸过滤，弃去滤液。沉淀放回原烧瓶中，加水40ml，在水浴上加热至50℃并保持30min，以溶解可溶性果胶。过滤，用少量水洗涤滤纸和沉淀，滤液移入50ml容量瓶中并加水至刻度，摇匀。吸取1ml按工作曲线绘制的测定步骤显色，测定可溶性果胶的半乳糖醛酸含量。

将沉淀物放入原烧瓶中，加1N硫酸，在沸水浴上回流加热1h，使原果胶水解。冷却至室温后移入100ml容量瓶中，加水定容。同上测定原果胶的半乳糖醛酸含量。

(四)结果计算

先分别计算水溶性果胶及原果胶的半乳糖醛酸%。再乘以果胶物质换算因素，即可分别测得水溶性果胶%及原果胶%，两者之和为总果胶物质%。计算公式如下：

式中：C——工作曲线上查得样品液半乳糖醛酸浓度(μgml)；

V——待测样品液总体积(水溶性果胶的半乳糖醛酸待测液为50ml，原果胶为100ml)；

W——样品重(g)。

2．果胶%=半乳糖醛酸%×果胶物质换算因数

果胶物质换算因数：糖用甜菜78．1%，甜橙77．7%，柠檬94．2%，柑桔96%，苹果72－75%，黑穗状醋粟78．5%。

(五)注释

①植物中天然果胶分离是困难的，因此果胶定量测定都应用间接方法，即测定果胶水解后所生成的各种产物含量为基础。木法是以测定经脱糖及其它杂质后，果胶酸水解所形成的半乳糖醛酸为定量基础，所以标准液用半乳糖醛酸配制。

②待测液中的半乳糖醛酸，在硫酸溶液中与咔唑试剂作用，生成紫红色化合物，其强度与半乳糖醛酸成正比，故用以比色定量。由于显色时用浓硫酸，对仪器有较强腐蚀性，操作时应特别小心。