皮肤、血液浓缩查菌法
出处:按学科分类—医药、卫生 科学普及出版社《麻风病实验室工作手册》第63页(1524字)
(一)皮肤组织浓缩查菌法
1、胰酶消化法
(1)采取新鲜皮肤活体,行15磅15分钟高压蒸汽灭菌。如果皮肤组织已先经福尔马林固定,须在高压灭菌前,先用流水冲洗12小时,洗去福尔马林。
(2)用消毒无菌的剪刀将组织剪成碎屑。
(3)用1%胰酶(用pH7.8的磷酸盐缓冲液配制),在37℃下消化5小时左右。
(4)待组织消化完全后,加数毫升蒸馏水,混匀,4000转/分离心30分钟。
(5)小心倾去上清液,用白金耳取管底沉渣涂片。
2、木瓜酶消化漂浮浓缩法
(1)采取皮肤活体,行15磅15分钟灭菌。
(2)置乳钵中,加1%木瓜消化剂5毫升,将组织研磨成糊状。
(3)将糊状物倒入试管中,置于50~55℃,过夜。
(4)倾入250毫升长颈瓶中,加蒸馏水至半量,石油醚2毫升,用力振荡10分钟,再加水至瓶颈部、摇匀,静置10分钟。
(5)用滴管吸取瓶颈处的石油醚层,制成厚片。
(二)血液(骨髓)浓缩查菌法
1、溶血法:取静脉血防凝(或不防凝),加稀醋酸(或稀盐酸)使溶血。4000转/分离心30分钟,倾去上清,取沉渣涂片。
2、白细胞层法:取静脉血防凝,置试管内,2000转/分离心5分钟。此时,试管内血液分为3层,上层为血浆,下层为红细胞,中层为白细胞。肉眼观察白细胞层呈白色。用滴管吸取白细胞层白细胞涂片。
注意事项:
(1)浓缩查菌中所使用的一切用具、器皿,一定不要带有AFB。因此,用前必须妥为洗涤,用后要严格处理,清除细菌。
(2)所用载玻片宜用新的,并一次性使用。
(3)如标本需要送往外地检查,可以先行高压蒸汽灭菌然后寄出。但切不可将已染片高压灭菌,否则,着色的细菌将全部褪色。
表1 麻风病临床查菌送检报告单
表2 麻风病临床查菌结果记录单
注:形态指数是否检查根据需要决定。
表2 麻风病细菌检查复核表
“注”1、评定合格与不合格率是指以每张涂片的部位达75%以上符合率为界。
2、表右下涂片合格率是指抽查某县所有涂片的三项平均合格率。
3、此表由抽片人填写基层县检查及复核结果一式三份,分别由省地县防治机构各存1份。