胰蛋白酶抑制剂(从牛肺中提取)

出处：按学科分类—工业技术 企业管理出版社《精细化学品制备手册》第319页（1707字）

制法

(1)处理 将新鲜或冷冻牛肺，冲洗干净后，用绞肉机绞碎(先切成小块后再绞)，把牛肺糜浆倒入搪瓷缸中。

(2)提取 在搪瓷缸中，加5倍体积的水(相对于牛肺来讲)，搅拌下，用3mol／L硫酸调节pH值至2．0，然后搅拌提取8～10h，用双层纱布过滤，滤渣再按同样条件提取一次，收集两次滤液，调节滤液pH值为1．5左右。

(3)盐析 在pH值1．5的滤液中，在搅拌下，慢慢加入硫酸铵粉末(每升滤液加227g)，再次校正pH值至1．5左右，然后静置过夜。次日虹吸出上清液，过滤盐析物。用20%氢氧化钠调节滤液pH值至5．5左右，再加硫酸铵粉末(每升滤液加入225g)，搅拌均匀后静置2d，然后滤除滤液，收集盐析物。

(4)去杂蛋白 将盐析物放置大烧杯中，用10倍质量的水溶解盐析物，搅拌2h，放入4℃冰箱中过夜。过滤，收集滤液，弃去沉淀物。在滤液中加入50%的三氯乙酸(加量为滤液体积的1／20)，搅拌均匀，立即加热到80℃，冷却至30℃以下，用双层纱布过滤，收集滤液于搪瓷桶中。

(5)盐析 将滤液用20%氢氧化钠溶液调节pH值至3．0，搅拌下缓慢加入硫酸铵粉末(按每升滤液加610g左右计算)，待硫酸铵完全溶解后，置室温下过夜，然后用双层纱布过滤，收集盐析物，弃去滤液。

(6)硫酸锌盐析 把收集的盐析物移入玻璃烧杯中，加入5倍体积的新配制的pH值5．5、0．1mol／L乙酸钠缓冲液和1倍体积0．4mol／L的硼酸缓冲液，搅拌使盐析物完全溶解。然后在搅拌下，按每升溶解液加1050g硫酸锌粉末，待硫酸锌全部溶解后，于室温静置过夜，次日用双层纱布过滤，弃去滤液，收集盐析物。

(7)透析 将硫酸锌盐析物移入烧杯中，用4倍体积的水使盐析物全部溶解，然后装入透析袋中，在10℃以下对自来水透析过夜，然后加硅藻土过滤，收集滤液。

(8)脱盐 将滤液移入搪瓷桶中，加入201×7阴离子交换树脂和101×7阳离子交换树脂的质量比为：201×7∶101×7=3∶1，搅拌吸附30min，用氯化钡溶液检查，至无白色硫酸钡沉淀为止(取几滴吸附液加1滴氯化钡溶液)，过滤回收树脂，收集脱盐液。

(9)沉淀 在脱盐液中加入1．8kg氯化钠和1．5倍体积的丙酮，搅拌均匀，静置后过滤，滤液再加4倍体积的丙酮，静置过夜，虹吸回收上清液(可回收丙酮)，淀粉分别用丙酮、乙醚洗涤，干燥。再溶于60倍体积的甲醇溶液(80%)中，在水浴中搅拌2h，过滤，收集滤液，弃去滤渣，再按滤液体积的1%加入氯化钠溶液(30%)，加入5倍体积的丙酮，搅拌均匀，静置过夜，用离心机分出沉淀，上清液可回收丙酮。沉淀用丙酮洗涤2次，放置干燥器中干燥沉淀物。

(10)溶解、沉淀、干燥 将沉淀物用60倍体积的蒸馏水溶解，然后用20%的氢氧化钠调节pH值至11左右，在4℃放置过夜。过滤，滤液用乙酸调节pH值至4～5，最后加入1%量的氯化钠溶液(浓度为30%)和5倍体积的丙酮，静置过夜，收集沉淀，清液用于回收丙酮，将沉淀分别用丙酮、乙醚各洗涤一次，干燥，即得产品。

胰蛋白酶抑制剂，又称抑肽酶，是一种小分子蛋白酶，相对分子质量6200，是由58个氨基酸残基组成的碱性多肽。它对胰蛋白酶、糜蛋白酶、纤溶酶、凝血酶及各种组织或血浆激肽释放酶等蛋白酶有广普的抑制作用。临床上广泛用于治疗急性胰腺炎、烧伤后的休克及产后大出血等病，有独特的疗效。