丁基羟基茴香醚(BHA)
出处：按学科分类—工业技术 中国轻工业出版社《食品添加剂分析检验手册》第30页（4250字）
化学名：叔丁基－4－羟基茴香醚
结构式
分子式：C11H16O2
相对分子质量：180．25
一、BHA的鉴别
1．试剂和溶液
1．1 无水乙醇 分析纯。
1．2 四硼酸钠(硼砂) 分析纯，12%溶液。
1．3 2，6－二氯醌氯亚胺 分析纯。
1．4 三氯化铁 化学纯，0．2%无水乙醇溶液。
1．5 2，2－联吡啶 分析纯，0．2%无水乙醇溶液。
2．操作步骤
2．1 加四硼酸钠 在试样的乙醇溶液中，加2mL12%四硼酸钠溶液及2，6－二氯醌氯亚胺结晶数粒，应出现蓝色。
2．2 加三氯化铁 0．5%试样乙醇(50%)溶液5mL，加2mL三氯化铁溶液和2mL2，2－联吡啶溶液，应出现红色。
二、BHA的定量方法
1．试剂和溶液
1．1 内标液 精确称取4－叔丁基苯酚500mg，用丙酮溶解并定容至100mL。
1．2 标准液 精确称取药用级参比标准3－叔丁基对羟基茴香醚和2－叔丁基对羟基茴香醚10mg，用内标液溶解，并最终配成各含9mg／mL和1mg／mL的混合液。
2．测定方法
精确称取试样100mg，用内标液溶解并定容至10mL，作为试样液。用具有氢焰电离检测器的气相色谱仪进行色谱分析。用1．8m×2mm(内径)不锈钢柱，填有10%GE·XE－60(20%氰乙基－甲基硅氧烷)。等温段175～185℃。进样和检测器温度依次为225℃和250℃。载气氦的流量为30mL／min。
3．分析结果的表述
用标准液和试样液各进样约5μL，记录色谱图。测定各异构体的峰面积。按式(2－1)求取试样中各异构体的质量(m)：
m=10ρs(Ru／R5) (2－1)
式中 ρs——标准液中异构体浓度，mg／mL
Rs——标准液色谱图中异构体峰面积和内标液之比
Ru——试样液色谱图中异构体峰面积和内标液之比
最后求得试样中BHA和两异构体的总量，mg
三、食品中BHA的含量测定
(一)气相色谱法
1．试剂和溶液
1．1 戊烷饱和的乙腈 取乙腈1000mL，加戊烷200mL，充分振摇后静置，分取乙腈层。
1．2 无水硫酸钠 硫酸钠(无水)于110℃干燥16h。
2．操作步骤
2．1 植物性油脂食品 准确称取样品约5g，加20mL戊烷溶解油脂成分，必要时在水浴上加温溶解，过滤，定量移入分液漏斗。
2．2 动物性油脂食品 准确称取样品约5g，在40～50℃水浴中熔化后，移入离心管，加15mL戊烷，充分搅拌，再加5mL氨水，充分振摇。离心分离后分取戊烷层，合并全部戊烷层，加5g无水硫酸钠放置10min，过滤。残渣用10mL戊烷洗涤，洗液与滤液合并。将此液定量地移入分液漏斗。
2．3 固体食品 准确称量细切的样品约5g，置均质器杯中，加15g无水硫酸钠和100mL戊烷，均质后过滤。残渣加100mL戊烷，剧烈搅拌后过滤，合并滤液，减压浓缩至约20mL，定量移入分液漏斗。
2．4 样品溶液的制备 在分液漏斗中加入100mL用戊烷饱和的乙腈，振摇，分取乙腈层，再每次用100mL用戊烷饱和的乙腈反复提取2次。合并全部乙腈层，减压浓缩近干，准确加正己烷至5mL，作为样品溶液。
2．5 标准液的制备 准确称取20mgBHA，加正己烷溶解，准确成100mL作为标准液(此液1mL含BHA200μg)。准确量取标准液0．1mL、2mL、3mL、4mL、5mL，分别加正己烷至5mL，作为标准曲线。用标准液(此液分别含BHA0、40μg／mL、80μg／mL、120μg／mL、160μg／mL、200μg／mL)。
3．测定方法
3．1 测定条件 用具氢焰电离检测器的气相色谱仪(FID-GC)，按下列条件进行测定。
填充剂：60～80目气相色谱仪用硅藻土载体按5%的比例涂以Silicome OV－17
色谱柱：玻璃管，内径3mm，长约2m
柱温：150～170℃，恒温
进样口温度：250℃
检测器温度：250℃
载气：氮气，40～60mL／min流速恒定
3．2 标准曲线 准确量取标准曲线用标准液各5μL，注入气相色谱仪，依峰高绘制标准曲线。
4．分析结果的表述
准确量取样品溶液5μL，注入气相色谱仪，由峰高在标准曲线上求样品溶液中BHA浓度(μg／mL)，然后根据式(2－2)计算样品中BHA含量(g／kg)：
式中 ρ——样品溶液中BHA浓度，μg／mL
m——采样品质量，g
(二)比色法
1．原理
样品用石油醚萃取，根据BHA在石油醚和含水乙醇中分配不同，使其溶解在72%乙醇溶液中，BHA再与2，6－二氯醌氯亚胺－硼砂溶液生成一种特有的蓝色物质，可进行比色定量。
2．试剂和溶液
2．1 2，6－二氯醌氯亚胺溶液0．01% 称取50mg2，6－二氯醌氯亚胺，溶于50mL无水乙醇中，置棕色试剂瓶中。
2．2 硼砂 分析纯，2%水溶液。
2．3 石油醚 沸程30～60℃，分析纯。
2．4 乙醇 分析纯，75%乙醇。
2．5 BHA标准溶液。
2．5．1 贮备溶液：1mg／mL，称取10mgBHA置于10mL容量瓶中，用75%乙醇溶解，并稀释至刻度。
2．5．2 工作溶液：10μg／mL，移取贮备溶液1mL置于100mL容量瓶中，加入75%乙醇稀释至刻度。
3．操作步骤
3．1 标准曲线的绘制 吸取BHA标准溶液0、0．1mL、0．3mL、0．5mL、0．7mL、1．0mL、1．5mL(相当于BHA0、1μg、3μg、5μg、7μg、10μg、15μg)，加入75%乙醇至12mL，然后加入2，6－二氯醌氯亚胺溶液2mL，摇匀；再加入硼砂溶液2mL，摇匀，静止15min，同时作空白。
以空白参比，用3cm比色池于620nm波长下测定吸光度，根据测得的吸光度绘制标准曲线。
3．2 测定方法 称取样品2g，置于50mL具塞量筒中，加入无水乙醇2mL，加入石油醚38mL，摇2min，静止24h，吸取上清液5mL，置于125mL分液漏斗中，以75%乙醇15mL、10mL、10mL三次提取，合并提取液于50mL容量瓶中，加75%乙醇至刻度(如遇混浊，离心或过滤)混匀供测定。
取上述供测定样品溶液2mL，加入75%乙醇至12mL，以下同标准曲线绘制方法操作。
4．分析结果的表述
根据测得的吸光度，从标准曲线上查得相应的BHA量，样品中BHA含量按式(2－3)计算：
式中 m1——相当于标准BHA的量，mg
m——测定时样品中相当于样品量，g