链球菌属
出处：按学科分类—农业科学 中国农业出版社《兽医微生物实验诊断手册》第219页（7105字）
革兰氏阳性球菌，成链状排列者有七属，或兼性厌氧，或厌氧，无需氧者。发酵碳水化物(如葡萄糖)或同型(分解产物主要的甚至唯一的是乳酸)或异型(分解产物不止一种，可以有甲酸、乙酸、丙酸、乙醇、戊酸等等中的两种或数种，可以有些乳酸或没有)，链条(以液体培养物为准)有长有短，长者10余个或数10个菌体相联，短者2～6个菌体相联。这七属简见表10-2。
表10-2 链状排列的革兰氏阳性球菌七属
*发酵型检查，见本节后附的发酵类型检查及乳酸纸层析法。
上述七属中与兽医最密切相关者为链球菌属，其他属在送检材料中殊少见，故此处只涉及链球菌属。
链球菌在自然界分布广泛，通常存在于水、土壤、粪便以及人畜体表、毛发、呼吸道、生殖道中。有的可引起人和动物多种疾病，主要是皮肤、呼吸道、循环系统及生殖泌尿系统的感染。在动物可引起牛的乳房炎、子宫炎、新生幼畜脐感染，猪链球菌病，羊链球菌病，马腺疫及家禽的某些疾患。一些种还可引起人的食物中毒。链球菌属的一些致病菌的分布及对动物疾病的关系可参看表10-3。
表10-3 链球菌属某些致病菌的分布及病原性
①Lancefield氏血清学分群的方法见后述“沉淀反应”部分。
②溶血类型：α型为菌落周围呈现一部分溶血的绿色带。β型为菌落周围出现透明的完全溶血圈。菌落周围不溶血的为γ型。
一、链球菌属种的鉴别
种的鉴别可依据伯吉手册八版所列的“链球菌属内种的检索表”进行。
链球菌属内种的检索表
Ⅰ．在10℃或45℃不生长(血链球菌S．sanguis中某些菌株除外)。在6．5%的NaCl培养液中，在pH9．6或在0．1%的美蓝牛奶中不生长。
A．不水解马尿酸钠(停乳链球菌S．dysgalactiae的某些菌株除外)。
1．在血琼脂上，不需要高的CO2张力度就能迅速生长。细胞和菌落都不“微小”。从精氨酸产铵。
a．不发酵菊糖
b．溶血纤维蛋白
c．β-溶血性。发酵海藻糖，但不发酵山梨醇。
d．不发酵甘油。Lancefield A群
1．化脓链球菌(S．pyogenes)
dd．好氧发酵甘油。Lancefield C群。
2．类马链球菌(S．equisimilis)
bb．不溶血纤维蛋白。
c．β-溶血性。
d．发酵山梨醇，不发酵海藻糖。好氧发酵甘油。
Lancefield C群。
3．兽疫链球菌(S．zooepidemicus)。
dd．不发酵海藻糖，山梨醇或甘油。Lancefield C群。
4．马腺疫链球菌(S．equi)
cc．非β-溶血性。发酵海藻糖。通常发酵山梨醇。不发酵甘油。Lancefieid C群。
5．停乳链球菌(S．dysgalactiae)
aa．通常发酵菊糖
b．可能是或不是β-溶血性。不溶胆汁。在5%的蔗糖培养液中能产生带粘性的多糖。Lancefield H群。
6．血链球菌(S．sanguis)
bb．在5%的蔗糖培养液中不产生带粘性的多糖。在血琼脂上呈α反应。不溶胆汁。抗原型未被证实过。
7．肺炎链球菌(S．pneumoniae)
2．在血琼脂上，需要高的CO2张力度才能迅速生长。细胞和菌落“微小”。从精氨酸产氨。Lancefield F群和Ⅰ型。G群
8．咽峡炎链球菌(S．anginosus)
B．水解马尿酸钠
1．从精氨酸产氨。好氧发酵甘油。可能是β-溶血性。在葡萄糖培养液中的最终pH是4．2～4．8。Lancefield B群。
9．无乳链球菌(S．agalactiae)
2．不从精氨酸产氨。不发酵甘油。无溶血性。在葡萄糖培养液中最终pH是5．6～6．5。抗原群未被证实。
10．少酸链球菌(S．acidominimus)
Ⅱ．在10℃不生长。在45℃生长(除缓症链球菌S．mitis外)。在6．5%的
NaCl培养液，pH9．6或0．1%的美蓝牛奶中不生长。不从精氨酸产氨(除缓症链球菌外)。无β-溶血性。
A．在50℃时不生长。在2%的NaCl肉汤中生长。
1．不水解淀粉。在40%的胆汁血琼脂中不生长。
a．在血琼脂上γ-反应。发酵棉子糖和菊糖，在5%的蔗糖和棉子糖琼脂上，形成大的粘的菌落Lancefield K群。
11．唾液链球菌(S．salivarius)
aa．在血洋菜上呈α-反应。不发酵菊糖，能或不能发酵棉子糖。在5%的蔗糖洋菜上不形成粘菌落。未证明血清类群。
12．缓症链球菌(S．mitis)
2．水解淀粉。在40%的胆汁血洋菜上生长。
a．发酵乳糖。Lancifield D群。
13．牛链球菌(S．bovis)
aa．不发酵乳糖。Lancefield D群。
14．马链球菌(S．equinus)
B．在50℃生长。在2%的NaCl培养液中不生长。未证明血清类型。
15．嗜热链球菌(S．thermophilus)
Ⅲ．在10℃和45℃都生长。
A．在6．5%的NaCl培养液中，pH9．6或0．1%的美蓝牛奶培养基中都生长。
1．利用精氨酸为能源。发酵山梨醇，不发酵阿拉伯糖。在简单培养基上生长不需叶酸。Lancefield D群。
16．粪链球菌(S．faecalis)
2．不利用精氨酸为能源。但水解精氨酸产氨。发酵阿拉伯糖。不发酵山梨醇。在简单培养基上生长需叶酸。Lancefield D群。
17．屎链球菌(S．faecium)
B．在6．5%的NaCl培养液和pH9．6时生长。在0．1%的美蓝牛奶中不生长。发酵阿拉伯糖和山梨醇。在简单的培养基上生长需要叶酸。不从精氨酸产氨。含有Lancefieid Q群和D群抗原。
18．鸟链球菌(S．avium)
C．在6．5%的NaCl培养液，pH9．6或0．1%的美蓝牛奶中不生长。发酵山梨醇。不发酵阿拉伯糖。在简单培养基上一般需要有叶酸才能生长。从精氨酸产氨。
19．乳房链球菌(S．uberis)
Ⅳ．在45℃不生长；在10℃生长。在6．5%的NaCl培养液或pH9．6时不生长。在0．1%的美蓝牛奶中生长。Lancefield N群。
A．从精氨酸产氨。
20．乳链球菌(S．lactis)
B．不从精氨酸产氨
21．乳酪链球菌(S．cremoris)
二、病原菌特征及实验室检查
(一)样品采集
1．患病动物的脓汁、血液、乳汁、渗出液、病变组织、呼吸道及生殖道分泌物等。
2．用于食品卫生检验的乳及乳制品，有关食品。
(二)涂片检查 用采集的病料直接涂片，或用18h的幼龄培养物涂片，染色镜检，根据形态、排列、染色反应进行初步判断。
液体培养基中，及动物体液(腹腔渗出液、心包液等)和乳汁中多呈长链排列。固体培养基上的培养物或原始组织材料涂片中多呈短链，但马腺疫链球菌在脓汁病料中可呈长链状。
(三)分离培养 常用的液体培养基有马丁肉汤，血清肉汤、葡萄糖肉汤等。固体培养基常用血液平板。
在液体培养基中不形成菌膜，一般在管底形成沉淀、上层清亮。血液琼脂平板上可出现α、3或γ三种类型之一的溶血现象。常见的致病性链球菌多形成针尖或针头大、半透明、圆形光滑凸起的菌落。
对生长条件要求较高，需要复杂的营养成分，在有血液、血清或腹水的培养基上生长良好，普通营养琼脂上生长不良或不生长。最适培养温度37℃，最适pH7．4～7．6。但有些种(如全部D群链球菌)可在45℃，或pH9．6的条件下生长，常被作为其鉴别的特征之一。
(四)生理生化特性 链球菌的生理生化特性为其种的鉴定的依据，详见表10-4。
表10-4 常见链球菌种的耐性试验及主要生化特性
注：-示大多数(90～100%)菌株阴性 +示大多数(90～100%)菌株阳性ND示无资料或资料不足d示有些菌株阳性，有些菌株阴性(+)示迟缓反应
(五)血清学反应
1．凝集试验 利用玻片凝集试验可将溶血性链球菌分型。把菌株制成均匀的菌悬液，再与标准血清进行凝集反应，根据反应有无凝集现象出现进行判定。
2．沉淀试验(Lancefield兰茜菲尔德氏分型)
(1)多糖抗原制备 将待检菌株接种于5%血清肉汤内，37℃培养24h后移接于0．2%葡萄糖肉汤，再培养6h取1ml接于50ml0．2%葡萄糖血清肉汤(一般加入5%兔血清)，37℃培养24h。此培养液以4000r／min离心30min，弃去上清液，用无菌生理盐水洗涤沉淀。再离心弃去上清液，沉淀物用1ml0．05mol／L的盐酸生理盐水悬浮，100℃水浴15min，并不断振荡，之后将此悬液再行离心，取上清液，加入一滴0．04%溴麝香草酚蓝，用0．2mol／l氢氧化钠液中和至颜色由黄变为浅绿色，除去出现的沉淀，此上清液即为多糖抗原。
(2)方法 在直径2～4mm的细管中，先用毛细管加入少许诊断血清(即用标准菌株生产的Lancefield氏A、B、C、D……各群血清，兽医微生物中常用的是B群、C群血清，亦可自己由已知血清群的菌株制备)于管底，不能有气泡产生。再吸取以生理盐水作1∶20稀释的多糖抗原，沿管壁小心加入，使其慢慢重叠于血清上，不能产生气泡，在两液交界面上，30min内出现白色沉淀环者为阳性反应，无者为阴性。
如需测定效价，可把多糖抗原用生理盐水做成不同稀释度，再进行试验。但一般不需要。
利用沉淀反应可将链球菌区分为不同的血清群。
三、几种常见致病链球菌的检查
(一)引起牛乳房炎的链球菌 引起牛乳房炎的链球菌种类较多，但最常见的为无乳链球菌、停乳链球菌，兽疫链球菌，乳房链球菌等。牛乳房炎的诊断包括三个方面，即临床检查(可参阅有关书籍)、涂片镜检、细菌学检查。
乳汁样品的涂片检查，对乳房炎的诊断很有帮助，常可从乳汁中有无红细胞、白细胞的存在，甚至直接检出链球菌来作出诊断。如从一个慢性乳房炎的牛乳样品中(只要样品是新鲜的)观察到链球菌时，就几乎可以肯定无乳链球菌的感染。但应当注意的是，有的乳房炎乳样品中，当菌数少时难能观察到细菌。一般1ml中有10万个以上细菌时，涂片中易观察到；如菌数在1万以下，则每个视野中平均菌数少于1个，不容易看到。
细菌学检查可参看表10-5。
表10-5 引起牛乳房炎的几种链球菌的比较鉴别
CAMP试验：在绵羊血平板上方先划一横线接种β型溶血的金色葡萄球菌，距此横线约1cm的下方，划垂直线接种被检链球菌，各被检菌的接种线相距约一指，一平板上可接3～5个被检菌。置37℃培养24h，如横线与直线相邻空间的溶血区明显增大者为阳性，因B群链球菌产生CAMP因子能增强葡萄球菌的β溶血，故无乳链球菌为CAMP试验阳性。CAMP是首先提出本试验的四个人(Christie，Atkins，Munch，Peterson)姓的第一个字母缩合。
(二)猪败血性链球菌的诊断 猪链球菌病是由链球菌引起的一类疾病的总称。其中以淋巴结脓肿最为常见，但以败血性链球菌病危害最大，它可由多种链球菌引起，如兽疫链球菌、类马链球菌及L、R、S、T等群的链球菌。我国流行的是C群兽疫链球菌。
组织涂片检查，常见呈单个、双球或短链状排列(3～5个菌体)，有时可见荚膜。在血平板上生长良好，呈β型溶血。
可对采集的病料进行细菌分离、生化试验和血清学分群试验等，以作最后确定。
动物试验：用肝、脾或血液作成1∶10悬液，以0．1～0．2ml量皮下接种小自鼠，15～56h死亡，组织中可以分离出链球菌，组织涂片亦可看到。
(三)羊链球菌病 羊链球菌病为羊的急性热性败血性传染病，主要发生于绵羊，由β型溶血性链球菌引起，属C群兽疫链球菌的变种。
组织涂片中为革兰氏阳性有荚膜的双球菌，少数为短链(3个菌)，由于荚膜不厚，要仔细看，有经验的可凭涂片作出诊断。但组织液中及营养丰富的液体培养基中常为长链。
动物试验：家兔和小白鼠最为敏感，腹腔接种后很快死亡，腹腔渗出液中可见呈长链的细胞，即可作出诊断。