非洲猪瘟病毒

出处：按学科分类—农业科学 中国农业出版社《兽医微生物实验诊断手册》第644页（2526字）

本病毒原属虹色病毒科，现已分出。它能感染各种猪，我国尚无此病，应严防传入。病毒子直径约为175-220nm，二十面体对称，壳粒数大概是812或更多，成熟病毒子具有囊膜。

一、样品采集

在病、死猪的淋巴结、骨髓、肝、脾和肺等器官组织和血液、体液以及各种分泌物和排泄物都含有多量病毒。病毒常积聚在细胞浆内。初次分离，常取脾、淋巴结或血液作样品。

二、病毒分离

(一)细胞培养 多数毒株能在健康猪的白细胞或骨髓原代细胞培养中繁殖，产生或不产生细胞病变，可用血吸附试验加以证实。适应之后，也能生长于猪的其他组织细胞、鸡或牛肾细胞和一些传代细胞系，如BHK-21和Vero细胞。

(二)鸡胚接种 本病毒可在鸡胚卵黄囊中生长。某些毒株，特别是猪／兔交替通过兔体适应株，常可在6～7天内致死鸡胚。

(三)动物试验 家猪是唯一能感染发病的动物；疣猪(Wart hog)和其他野猪可被感染而无明显的临床症状。

病毒能在某些蜱中繁殖，并经卵传代；这些蜱可能是一种传播媒介。

三、血清学试验

(一)血吸附和血吸附抑制试验 本病毒未发现血凝素，但有血吸附现象并可被抗本病毒的免疫血清所抑制。在实际应用中，白细胞培养的血吸附试验可用于非洲猪瘟与猪瘟的区别诊断。

1．从正常猪采集脱纤血。

2．用无菌纱布过滤血液，然后以2000r／min离心沉淀30min，吸出血清并作保存。

3．用广口吸管吸取白细胞，将其再悬浮于3／4上述保存的血清中。

4．加入抗生素并以每管1ml的量分装于细胞培养管。

5．在37℃培养至少24h。这种培养管一般都含有足够的红细胞，以供吸附之用，不必外加。

6．接入病料悬液(20%脾悬液0．2ml)，再培养24～48h。

7．检查白细胞表面是否有红细胞被吸附。

8．本试验的特异性可用血吸附抑制试验证实。

普通的血吸附抑制试验不适用于本病毒的检测，因为该病毒的生长能很快就克服抗血清的抑制作用，必须将方法略加修改。具体的方法如下。

1．以0．1ml内含不少于10⁵HAd₅₀的非洲猪瘟病毒接种在3天龄白细胞培养中。

2．培养24h或直至大多数白细胞都出现血吸附现象。

3．用2ml蒸馏水洗涤培养物，使红细胞溶解。

4．吸出水分，加入1ml二倍系列稀释的待检血清(先在56℃经30min灭活)，每一稀释度接两管。以稀释培养基代替待检血清作为对照。培养于37℃经1h。

5．每管加入0．1ml2．5%的猪红细胞悬液，培养30min，检查结果。血清的血吸附抑制效价，与猪的免疫力无相关性。亦可用已知抗血清检测所分离的可疑病毒。

(二)琼脂扩散试验 亦可用于非洲猪瘟病毒抗原或抗体的检测。检测抗原时，可采取一小块病、死猪的淋巴结、肝、肾或脾置于琼脂板的小孔中，以已知抗原作为对照，已知抗血清放在中间孔内。24～48h后，可检查沉淀线作出判定。用已知抗原亦可检测试样血清的抗体。一般用经特异性标化的、感染本病毒的Vero细胞培养的细胞碎片作抗原。

(三)补体结合试验 可用于检测猪血清中的非洲猪瘟抗体。以感染的猪肾细胞培养液制备抗原。可用稀释甲醛液处理猪血清以除去其亲补体活性(Procomplementary actiVity)，加入少许正常牛血清以增强对低抗体效价的检测。一种修改的方法是在豚鼠补体中加入5%新鲜而不灭活的牛血清。抗原则由感染的肝或脾制备。先以丙酮-醚处理，除去组织的非特异性活性。补结抗体的效价，也不与动物的免疫状态相关。

(四)直接和间接荧光抗体技术 可用于检测猪肾细胞和白细胞培养中非洲猪瘟病毒的共同抗原，但对感染病猪的冰冻切片和组织抹片却不能令人满意。特异荧光常在近核处呈颗粒或球状细胞质包涵体出现，这也是感染的细胞培养姬姆萨染色包涵体所在的地方。两法染色的包涵体常呈环状。有包涵体的细胞，一般都有核破裂发生。

也可用对流免疫电泳、反向辐射免疫扩散(Reverse Radial Immunodiffusion Test，RRID)、间接免疫过氧化酶空斑染色法(Indirect Immuno-Peroxidase Plaque Staining Test，IIPS)、酶联免疫吸附测定法(ELISA)以及放射免疫测定法等，以检查可疑病猪或带毒猪的非洲猪瘟抗体，最好应用感染细胞培养制备的浓厚抗原或提纯抗原。

有报道用放射性同位素磷标记已知非洲猪瘟病毒DNA，作DNA—DNA杂合试验，可检测血液或组织样品中的非洲猪瘟病毒。

除作病原诊断外，也可用病料接种猪瘟免疫猪和易感猪作动物接种交互免疫试验，以判别非洲猪瘟与猪瘟。两者无交叉免疫。