布尼安病毒科
出处:按学科分类—农业科学 中国农业出版社《兽医微生物实验诊断手册》第689页(2905字)
本科成员均为虫媒病毒,病毒子圆形或椭圆,有囊膜,直径90~100nm。基因组为负股单股RNA,分为大、中、小三个节段,均为环状。三段核酸分别组成三个核衣壳,共同包在一个囊膜内。囊膜糖蛋白具有型特异抗原,能用补体结合、血凝和中和试验检测。病毒通过出芽而成熟,病毒子释放到感染细胞的高尔基氏囊和液泡内。
本科共有250以上成员,分为三个亚科和一些未分类的血清群。
1.布尼安病毒亚科(Bunyavirinae)——只有一个属,即布尼安病毒属(Bunyavirus),共150个成员,分为16个血清群。
2.白蛉热病毒亚科(Phlebovirinae)——有二个属:(1)白蛉热病毒属(Phlebovirus)——共38个成员,分为8个血清群和11个未分类成员。(2)乌枯病毒属(Uukuvirus)——有7个成员,包括在一个血清群内。
3.内罗毕病毒亚科(Nairovirinae)——只有一个属即内罗毕病毒属(Nairovirus),共29个成员,分6个血清群。
4.未分属的成员——尚有27个成员,分5个血清群和12个未分群。
一、赤羽病毒(Akabane virus)
本病毒是布尼安病毒属的一个成员,首先发现于日本的一个名为“赤羽”的农村,故名。本病毒感染牛羊,引起流产、死产和先天性畸形(积水性无脑和关节弯曲)。此病流行于日本、澳大利亚、以色列诸国,由蚊子传递。
(一)样品采集 最重要的样品是母畜及其感染子代的血清,一定要在吮初乳前采集。流产胎儿和死产仔畜则采取组织,脑和脊髓浸于10%福马林内作组织学检查;脑、脊髓、心、脾、肌肉和脑脊髓液作病毒分离。
(二)病毒分离
1.细胞培养 本病毒能在仓鼠肺细胞系的培养中生长;Vero、BHK-21、PK-15和BEK细胞中也能适应,但易感性稍低。病毒引起CPE和空斑形成。
2.鸡胚接种 将待检样品的1∶10悬液接种6日龄鸡胚卵黄囊。鸡胚虽不死亡,但可引起畸形。在鸡胚脑和肌肉中含有大量病毒,其他脏器含量较低。
3.实验动物 待检样品用肉汤作成1∶10悬液,加青链霉素,低速离心后接种1~2日龄乳鼠脑内,每鼠0.02ml。每一样品至少接种6只,观察10天有否出现神经症状。收集发病鼠脑,再传一代作病毒分离,并用中和试验鉴定。这是分离病毒最敏感的方法。
(三)血清学试验 迄今为止赤羽病毒的所有分离株在抗原性上都无差别。
1.中和试验 此法最常用,主要在微量滴定板的细胞培养中测定。
(1)不同稀释的待检血清与25个TCID50(如为试管法则用100个TCID50)混合,在室温作用1h。
(2)接种细胞培养孔,在37℃的CO2培养箱中培养。
(3)观察4天,当75~100%的细胞单层破坏时读取结果,计算抗体滴度。
2.血凝抑制试验 本病毒能凝集鹅、鸭和鸽的红细胞。HI试验的结果与中和试验基本一致,但敏感性较低,因此应用较少。
3.补体结合试验较少应用。
二、裂谷热病毒(Rift Valley fever virus)
本病毒为白蛉热病毒属的成员,首先发现于肯尼亚的裂谷地区,故名。它感染牛羊,使妊娠母畜发生流产,有10%母牛和20%母羊死亡。它也能感染其他反刍动物;猴、仓鼠、小鼠、大鼠和雪貂能被实验感染。人也能被感染,引起流感样症状。在幼畜中常呈最急性,感染后12h发病,24~36h即死亡。成年动物(不包括妊娠母畜)的症状轻微,仅表现短暂的发热和泌乳下降。蚊子为传播本病的主要媒介,健畜与病畜接触不被感染,但兽医人员与病畜密切接触时可被感染。
(一)样品采集 新鲜的流产胎儿,急性期的抗凝血液,肝、脾、肾和脑等脏器。血清学试验可采双份血清。
(二)病毒分离
1.细胞培养 本病毒能在鸡、鼠、仓鼠和羊的肾细胞培养中生长,接种后2~3天出现CPE。如用盖玻片培养,在CPE刚出现时用HE染色,可在感染细胞中看到嗜酸性核内包涵体(这种包涵体也发现于病羊肝的切片中)。
2.鸡胚接种 实验感染病死乳鼠的肝或待检病料接种鸡胚卵黄囊或绒尿膜,绒尿膜增厚但胚胎不死亡。
3.实验动物 样品悬液接种于1~3日龄乳鼠脑内(最少6只),在3~5天内常因急性肝炎而死亡。
(三)血清学试验 病毒中和、补体结合、免疫扩散和免疫荧光等试验均可应用。在补体结合试验中常用丙酮和乙醚提取的抗原。
本病毒能凝集小鼠、豚鼠和出壳雏鸡的红细胞,在诊断中可作HA和HI试验。
三、内罗毕绵羊病病毒(Nairobi sheep disease virus)
本病毒是内罗毕病毒属的一个成员,首先发现于肯尼亚首都内罗毕,故名。它主要感染绵羊和山羊,引起急性出血性胃肠炎和呼吸道症状,死亡率在前者中达30~90%,在后者中约为10%。本病由蜱传递。
(一)样品采集 发热期病羊的血液和脾。
(二)病毒分离
1.细胞培养 本病毒能在绵羊、小鼠或仓鼠肾(BHK-21)细胞培养中生长,并出现CPE。
2.实验动物 样品悬液接种于乳小鼠脑内,可引起神经症状,约10天致死。
(三)血清学试验 通常在细胞培养中作病毒中和试验,检测血清抗体。也可用补体结合和间接血凝试验。荧光抗体技术可检测感染细胞中的病毒抗原。