斐林—碘量法测还原糖

出处：按学科分类—农业科学 农业出版社《土壤农化分析手册》第612页（2335字）

(一)适用范围 5－15ml待测液糖溶液中含糖2－20mg，可用于一般果、蔬中含糖量的测定。因有标准曲线作为对照，所以可得较可靠的结果。

(二)试剂配制

1．斐林A：硫酸铜CuSO₄·5H₂O50g加水溶解，过滤，加0．5ml硫酸，定容于1L容量瓶。

2．斐林B：NaOH150g，酒石酸钾钠200g，溶解后定容于1L容量瓶中。使用前也可将斐林A、B两液等体积混合之。

3．25%KI溶液：125g碘化钾溶解于水，加3NN_aOH1ml，加水至500ml，贮存于冷暗处。

4．6N H₂SO₄：将167ml浓H₂SO₄，缓缓注入833ml水中。

5．0．5%淀粉指示剂：淀粉1g加少量水拌匀，缓缓倾入200ml沸水中，。搅拌成稀度透明液。

6．0．05NNa₂S₂O₃溶液：先配制1NNa₂S₂O₃溶液，即将260gNa₂S₂O₃·5H₂O溶解于100ml煮沸后已冷却的水中，另加无水碳酸钠2g。取1NNa₂S₂O₃液250ml，用煮沸后已冷却的水稀释成5L(每升加HgI10mg防腐)，溶液贮于棕色瓶中放暗处，此为0．05NNa₂S₂O₃溶液。

Na₂S₂O₃的标定：精确称取预先在120℃干燥至恒重的K₂Cr₂O₇约2．0000g于500ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀。吸取25ml于碘量瓶中，加25%KI10ml和6NHCl10ml，摇匀，在暗处放置5min，用配制的0．05NNa₂S₂O₃滴定至黄绿色时，加淀粉指示剂1－2ml，滴定至蓝色消失而只有三价铬离子的绿色时为终点。同时作空白试验。

(三)测定步骤

1．糖溶液的提取

水提取法：新鲜样品洗净擦干，切成小块，用小烧杯称取10g，放入研钵中充分捣碎并研磨至糊状，用水洗入250ml容量瓶中。体积近150ml时，加2－3滴甲基红指示剂，如呈红色可用0．1N NaOH中和至微黄色。已经磨细的风干样品经称重并加少量水润湿后，洗入250ml容量瓶中，同上中和其酸性。然后放入80℃水浴中保温30min，其间摇动数次，以使糖分完全转入溶液中。含蛋白质多的样品，须加醋酸铅沉淀。为此可滴加10%中性醋酸铅，至不再产生白色絮状沉淀即可；过多的Pb(OAc)₂，须加饱和Na₂SO₄除去(少量蛋白质则不必除去，以减少操作步骤)，最后加水至刻度，摇匀过滤。

酒精提取法：对含有大量淀粉或菊糖的样品，用水提取会使部分糊精或菊糖进入溶液而影响分析结果，同时过滤也困难，为此，最好采用酒精提取法：将研磨成糊状的样品加80%酒精100ml，安装上迥流冷凝管，在水浴上80℃保温提取三次，第一次30min，后两次各15min，合并三次溶液。然后在85℃水浴上蒸发酒精提取液，一直到酒精只剩下大约3－5ml时，用水洗入250ml容量瓶中，定容，即为糖的提取液(酒精提取液不必除蛋白质，因蛋白质不会溶解出来，但若有酸时，则也须用0．1NNaOH中和之)。

双糖(蔗糖)的水解(对蔗糖含量很少或无须包括蔗糖的样品，可免去此步骤)。吸取上述澄清的糖液50ml，放入100ml容量瓶中，将容量瓶放入预热到80℃的水浴中，加3ml浓HCl于糖液中，继续保温8min，取出容量瓶，迅速冷却，以甲基红为指示剂，用饱和Na₂CO₃中和至金黄色，加水至刻度。

2．还原糖的测定：吸取待测液5－15ml(含糖在2－20mg范围)于小三角瓶中，用滴定管或吸管准确加斐林A5ml、B5ml(或加A、B等体积混合的斐林试剂10ml)，加水使总体积大约在25ml。混匀后在电炉上加石棉网，放置准确煮沸3min。取下三角瓶冷却，加入25%KI5ml和6N H₂SO₄6ml(注意加试剂次序，不可颠倒)，立即用0．05N Na₂S₂O₃滴定至淡黄色，加淀粉指示剂2ml，继续滴定至蓝色消褪为终点(滴定至终点后放置较久，又可呈现蓝色，这是因为过量的KI在酸性条件下，能被空气氧化而析出I2的缘故。滴定溶液中还可看到有Cu₂I₂浅黄色沉淀生成)。同时进行空白试验标定，求得空白标定与待测糖液滴定消耗Na₂S₂O₃毫升数之差，查标准曲线读得葡萄糖的毫克数。

3．标准曲线的绘制：称取干燥的化学纯葡萄糖0．2000g，加水溶解，定容100ml。此为2mg／ml标准葡萄糖溶液。

分别吸取此标准糖液1，3，5，7，9，11ml于6只小三角瓶中，加水补足至15ml，其余同上操作，最后用标准0．05NNa₂S₂O₃溶液滴定。

然后以空白标定与系列标准糖液消耗Na₂S₂O₃液毫升之差数为纵座标，系列葡萄糖的毫克为横座标，绘制标准曲线。

(四)结果计算