比色法测定淀粉含量

出处：按学科分类—医药、卫生 中国科学技术出版社《食物营养分析实用手册》第83页（1511字）

样品中可溶性的葡萄糖、果糖、蔗糖等用蒸馏水洗去，所得淀粉用酸水解，然后用蒽酮比色法测定水解淀粉所产生的葡萄糖含量，最后换算成淀粉含量。

试剂

(1)蒽酮试剂：称0．4克蒽酮溶于100毫升88%硫酸中，流水冷却，当天配制。

(2)3N盐酸：取25．2毫升浓盐酸定容至100毫升。

(3)3N氢氧化钠溶液：称12克分析纯氢氧化钠溶解于水并定于100毫升。

(4)葡萄糖标准溶液：称葡萄糖250毫克溶解并定容至250毫升容量瓶中，此为1毫克／1毫升溶液。取以上溶液10毫升，定容至100毫升，此为100微克／毫升的葡萄糖标准溶液。

操作步骤

1．标准曲线的制作：取5支试管，编号并依次加入标准葡萄糖液0，0．4，0．8，1．2，1．6毫升，以蒸馏水补齐至2毫升。以上各管葡萄糖含量依次为0，40，80，120，160微克。

各试管中加入蒽酮试剂6．00毫升，混匀，立即置于沸水浴中加热5分钟，取出立即冷却并不断摇动，以无糖试管为空白，在721型分光光度计中，以波长640nm处，测定其光密度值，以光密度为纵坐标，以葡萄糖含量为横坐标，制作标准曲线。

2．样品液的制备：称粉碎干燥的样品0．2克，置研钵中并加5毫升蒸馏水，研磨均匀，用5毫升蒸馏水全部投入离心管中，3000转／分离心10分钟，将上清液弃去。再将离心管中的沉淀物用水洗两次。离心弃去上清液。

以10毫升3N盐酸将离心管中沉淀物全部转移到容量瓶中，盖上玻璃塞，放在沸水浴中煮沸45分钟，取出冷却至室温，加3N氢氧化钠溶液10毫升中和酸性，用蒸馏水定容至50毫升。从中取2毫升溶液，加蒸馏水至50毫升，此为淀粉样品待测液。

3．淀粉含量的测定：取样液2毫升，再加6毫升蒽酮试剂，混匀，置沸水浴中5分钟，取出立即流水冷却，于640nm波长下测定其光密度值。

4．计算：从标准曲线中查出样品提取液糖含量，按以下公式计算淀粉百分含量。

式中：A：从标准曲线中查得样品提取液中糖含量(微克)；

50：样品液总体积(毫升)；

W：样品称重(克)；

50：样品液稀释体积；

100：换算为百分含量；

10⁶：换算克为微克；

0．9：换算糖为淀粉量；

2：用于稀释的样品液体积(毫升)；

2：用于比色时样品稀释液体积(毫升)。