非蛋白氮(NPN)的测定

出处：按学科分类—医药、卫生 中国科学技术出版社《食物营养分析实用手册》第107页（1465字）

将样液中的蛋白质沉淀除去，(除去的方法主要是加沉淀剂，如三氯乙酸等)。测得的氮即为非蛋白氮。

含氮化合物与硫酸共热，可生成硫酸铵，硫酸铵与氢氧化钠作用，产生氢氧化铵和硫酸钠，在有氢氧化钠存在下，氢氧化铵与奈氏试剂作用产生碘化二汞铵溶液。碘化二汞铵呈黄色，可用比色法测定。

试剂

(1)10%三氯乙酸溶液：称10克三氯乙酸(TCA)溶于水，稀释至100毫升。

(2)硫酸溶液(1∶1)：将1份浓硫酸缓缓倾入等体积蒸馏水中，混匀，冷却。

(3)1%硫酸铜溶液：1克CuSO4溶于蒸馏水中，定容至100毫升。

(4)30%NaOH溶液。

(5)2N氢氧化钠溶液：称8．0克氢氧化钠溶于蒸馏水。稀释至100毫升。

(6)奈氏试剂：

A液：称取茄替胶1．75克，加蒸馏水750毫升，回流2～3小时，过滤，滤液备用。

B液：将KI4克和HgI₂4克溶于25毫升蒸馏水中。

将A、B液混合，加蒸馏水稀释至1000毫升。临用时取此液加等体积水稀释。

(7)标准硫酸铵溶液：将硫酸铵于110℃烘2小时，置干燥器中冷至室温，准确称取0．4714克，溶于蒸馏水，加数滴H₂SO₄(防腐剂)称稀释至1000毫升。此溶液含氮量为100微克／毫升，可长期保存，临用时将其稀释至25微克／毫升。

操作步骤

1．样品的消化：吸取1．5毫升猪血清置离心管内，加入10%三氯乙酸1．5毫升，使蛋白质沉淀，3000转／分离心5分钟，吸取上清液1．0毫升，置凯氏烧瓶中，加1∶1H₂SO₄溶液1毫升及1%CuSO₄溶液4～6滴，烧瓶口内插一小漏斗，斜置于电炉上加热。等白色烟雾消失后，加入3滴30%H₂O₂，继续加热至烧瓶内液体透明(约15分钟)，冷却，倒入10毫升容量瓶内，用少量蒸馏水洗涤凯氏烧瓶，洗涤液皆倒入容量瓶，最后用蒸馏水稀释至刻度。

2．显色：将3支试管按0，1，2编号，0号为空白管，加0．5毫升蒸馏水，1号为样品管，加入稀释后的消化液0．5毫升；2号为标准管，加入标准硫酸铵溶液0．5毫升。各管均加奈氏试剂(1∶1稀释)2．0毫升，再加2NNaOH溶液1．5毫升，混匀，20分钟后用721型分光光度计波长490nm测光密度。

3．计算：

式中：OD₁为样液光密度；

OD₂为标准液光密度；

V为所取稀释消化液相当于血清毫升数，