火鸡支原体感染
出处:按学科分类—农业科学 中国农业出版社《禽病手册》第444页(5415字)
火鸡支原体感染是由火鸡支原体(MM)引起的,经蛋传递,主要发生在雏火鸡,主要病变为气囊炎。是一种世界性分布的疾病。
一、诊检要点
(一)临床表现
急性症状只见于幼年火鸡,主要表现为程度不同的生长迟缓,身躯明显矮小,骨骼短粗。少数火鸡出现曲颈,翅上主要羽毛张开突出。
在感染火鸡群中,5%~10%的雏火鸡表现出临床症状。尽管感染母火鸡所生小火鸡气囊炎的发生率很高,但很少见到呼吸道症状,偶尔见有窦炎症状。在育成火鸡群中MM通常表现为隐性感染。
MM可与艾奥瓦支原体协同作用产生严重的气囊炎。
本病可引起人工或自然感染火鸡胚晚期孵化(25~28天)的死亡率。同时感染MM和艾奥瓦支原体可造成火鸡孵化率严重下降。
临床表现为跗跖骨的弯曲、扭转和变短、跗关节肿大、颈椎变形、身体矮小和发育不良的所谓TS-65综合征(也被称为气囊炎缺陷综合征),可能与MM的蛋传递感染有关。
(二)病理剖检
源于感染母鸡的雏火鸡如果在孵出时有病变,也仅限于气囊,但病原菌却有可能广泛分布于不同组织,包括羽毛、皮肤、窦、气管、肺、气囊、法氏囊、肠、泄殖腔和踝关节。病变特征是气囊壁增厚,囊壁组织上带有黄色渗出物,偶有干酪样的絮片游离于气囊腔中。到3~4周龄时,这样的病变常蔓延到腹气囊。也有可能在1日龄雏鸡的气囊中存在此菌,但不表现病变,而在3~5周龄时有可能发生病变。MM单独感染时,引起的病变不如MG感染所表现的那样广泛或严重。
若存在骨骼病变时,常伴有严重的气囊炎。胸骨黏液囊炎、滑液囊炎及腹水是在人工感染中观察到的另外一些病变。MM和MS混合感染所产生的窦炎含有清亮黏液至干酪样渗出物。MM感染胚孵化出的雏火鸡跗跖骨弓形弯曲。
感染MM的胚胎,仅见渗出性气囊炎和肺炎等炎症变化。25~28日龄时发展的病变与炎症细胞的成熟有关。
(三)流行特点
火鸡支原体只寄生于火鸡,感染主要经蛋传播。火鸡生殖道的感染发生于以下几种情况:在胚胎发育过程中的内源性感染,在性成熟时闭锁板穿孔后从泄殖腔或法氏囊感染灶的上行感染,或由带支原体的精液授精而感染。MM可能在母火鸡输卵管的多个不同部位感染处于发育过程中的蛋,而感染的关键部位在输卵管伞部或峡部区域。MM在雄火鸡存在的一个可能部位是黏膜下腺体区域。初生幼雏之间也可以经过飞沫传播,未发现成年火鸡间经呼吸道传播的情况。这种支原体可以寄生于公、母火鸡的泄殖腔中,所以配种也是一条传染途径。
MM的直接和间接传播可能发生在禽类生命周期的任何阶段。经空气的直接传播可发生在孵化器内或在群内,或者偶发于距离400米以内的不同群之间。空气传播在育成火鸡群中常导致较高的感染率(可达100%),感染常常位于窦和气管,但在育雏期和生长期的幼龄禽类经呼吸道途径感染时,感染群中5%左右在生殖器官中有本菌存在。
间接传播是由于诸如交配、触诊母鸡、人工授精和免疫接种等管理活动引起的,支原体通过污染的手、衣物和设备人为地从感染的火鸡传递给未感染的火鸡。
当未感染的雌火鸡置于笼中与感染的雌火鸡接触时,不会发生同居传播。同样地,无病的雄火鸡与阴茎感染的雄火鸡置于同室,在整个生产期中,前者都会产生无MM的精液,却也不会发生同居传播。
(四)实验室检查
1.病原分离与鉴定
(1)病原分离:
①病料采集。MM可从卵黄膜、气囊、肠道和感染胚胎的许多其他部位分离出来,还可从由气囊途径感染的幼雏的肾中分离。
对于野外大量采样(例如从气管、腭裂、阴道或阴茎采样培养),将棉拭样品置于肉汤中运送到实验室。在剖检中,病菌可从呼吸系统(包括窦)和生殖系统的不同部位分离。
②分离培养。MM是一种兼性厌氧菌。最适生长温度为37~38℃,在40~42℃时生长缓慢。
分离病原时,火鸡支原体在固体培养基上比液体培养基中更易生长。培养MM效果较好的肉汤组分是:2.1%PPLO肉汤粉(Difco产品),1%酵母自溶物(Sigma产品),15%马血清(56℃、30分钟加热灭活)。固体培养基可加入1.2%Bacto琼脂。培养基的最终pH为7.5~7.8。常用的培养基还有Frey氏FM培养基和SP-4肉汤培养基。
在琼脂平板、斜面或肉汤中加入醋酸铊(1∶4000)和青霉素(1000国际单位/毫升)是一种杂菌抑制剂。在肉汤覆盖液中加入多黏菌素B(100国际单位/毫升)有助于从高度污染的组织(如泄殖腔或阴茎)材料中分离出MMc制霉菌素(50国际单位研)可加入到琼脂和肉汤中抑制真菌生长。
在初次分离的培养基中一经出现生长后,通常是培养4~6天,即可作平板画线,并将其置于带加湿的封闭容器中。平皿置于37℃培养5~6天,然后在解剖显微镜下检查菌落,至少要培养10天以上,才可做出阴性判断。
(2)病原鉴定:
形态及染色:MM肉汤培养物的姬姆萨染色涂片可见球状体,直径约0.4微米,与MG相似,这些球状体呈单个散在、成双或成小丛存在。超微结构研究证实,MM不具有MG典型的气泡样结构,但在中央核区可见较厚的纤丝。MM有一酸性黏多糖被膜已被证实。MM基因组的大小是(4.2±0.5)×108单位,17529株的DNA中鸟嘌呤(G)与胞嘧啶(C)的碱基含量27.0%~28.1%,这在支原体中均属于较低范围。
生长需要:MM是一种兼性厌氧菌。最适生长温度为37~38℃,在40~42℃时生长缓慢。MM的大多数分离株不易在肉汤中生长。血清是MM生长所需的基本成分,猪和马血清较为理想。
生化特性:根据MM不发酵葡萄糖,但可利用精氨酸,具有磷酸酶活性的特点,可将其与鸡和火鸡的其他支原体相区别。
在pH8.4~8.6肉汤中,MM可存活25~30天而仍具有高滴度(每毫升中含107个菌落形成单位)。新接种在琼脂上的培养物,置于室温下最少活6天。在空气中最少可活6小时。在试管中,MM的4个菌株置45℃条件下,其灭活时间从6小时到24小时不等,而置于47℃条件下,2株MM的灭活时间介于40~120分钟之间。
将MM分离物的琼脂菌落捣碎混于3%的蔗糖中,冻结于-20℃到-70℃,最少可保存2个月。琼脂斜面培养物盖以肉汤,贮存于-30℃,MM至少存活2年。冻干的培养物可无限期存活。在低温保存后再解冻,火鸡精液中MM的实际活株数量并没有下降。
鉴定:火鸡支原体不发酵葡萄糖,能水解精氨酸,在液体培养基中培养时,培养基的颜色由红变紫。在固体培养基培养时,也出现“煎蛋状”菌落。确切的鉴定必须基于血清学方法。常用的方法包括直接和间接荧光抗体试验、生长抑制试验和免疫过氧化物酶试验。
2.血清学检查
(1)查抗原:DNA检测技术最近在临床样品直接检验MM时得以开发利用。
(2)查抗体:快速平板凝集试验(RP)和试管凝集试验(TA)可有效检测MM感染。从感染蛋孵出的雏火鸡在3周内,以及接触传染的火鸡在4~5周内均可检出抗体。有活动性气囊病变的火鸡可能有高的凝集度;有窦或阴茎局部感染的火鸡,其抗体效价可能没有或很低。
快速平板凝集试验可通过血清稀释来定量判断。在血清1∶5稀释时,反应最为明显。但对整个禽群的诊断,某些样品应在1∶10或更高的稀释度下进行反应。为保证在高血清稀释倍数时的反应质量,每批抗原都应用标准阳性血清作预试验。
血凝抑制试验(HI)是另外一种检测MM感染抗体的实用方法。MM的无血凝性实验室菌株,在火鸡不能引起高水平的HI抗体反应,血凝抑制试验检测自然感染火鸡此类抗体是非常有效的。显然,野外MM感染是由具有血凝活性的菌株引起的,但大部分菌株的这种特性在实验室培养基上培养后很快丧失。因此,由于决定血凝性和凝集性的抗原决定簇不同,在感染群中发现个别火鸡血凝抑制抗体阳性而试管凝集试验阴性是可能的,相反的情况也可能发生。
Yamamoto等创建了一种微量滴定的凝集试验。使用4个单位的抗原,滴度1∶40为可疑,1∶80或更高为阳性,当作为快速平板试验的最后确诊方法时,HI阳性结果足以说明感染,但对HI阴性结果,则要慎重解释,可能需要另外的确诊性试验,或再重新检测,这样才能做出最后诊断。微量血凝抑制试验已被用来鉴别近年来在火鸡群中由于使用丹毒疫苗免疫而产生的假阳性反应。
Kleven和Pomeroy发现,快速平板反应能检查IgM,试管凝集试验能检出IgM和IgG,而检出IgG最有效的是血凝抑制试验。但火鸡对经静脉给予的高滴度MM的早期HI抗体反应是IgG。
为大量筛选而开发的其他试验方法包括微量凝集试验、酶联免疫吸附试验(ELISA)和亲和素-生物素增强的斑点免疫酶法。
3.类症鉴别要点 由MM所引起的气囊病变必须与MG、其他血清型的支原体和其他可能的致病因子所引起的气囊病变区别开来。如果观察到有胚胎死亡、窦炎或气囊炎发生,应考虑到MS或艾奥瓦支原体与MM混合感染的可能性。与MM感染有关的骨骼异常必须与由艾奥瓦支原体或营养不良而引起的相似病变相区别。
二、防治
(一)治疗
对支原体有抑制作用的抗生素有泰妙菌素等。
一些抗生素在体外对MM有作用,其中包括庆大霉素、四环素、壮观霉素-林可霉素、多黏菌素、壮观霉素和螺旋霉素、强力霉素和氟喹诺酮、交沙霉素。四环素、金霉素和链霉素的作用程度不一;而红霉素对MM无效。
在每升饮水中加入50毫克林可霉素-壮观霉素,连用5天;或在饮水中加入0.025%浓度的多黏菌素,连用3天,对MM感染有治疗作用。恩诺沙星能有效降低已经受到MM混合感染的幼雏的死亡率。用抗生素溶液(常用浸泡液是0.05%的庆大霉素与0.025%的季胺类化合物消毒药一起配合使用)浸蛋可明显降低气囊感染的发生率,且可以提高孵化能力,改善生长性能,减少骨骼异常的发生,并减少生产过程中的淘汰率。
(二)预防
1.一般预防措施 预防主要侧重几个方面,一是消灭卵中支原体减少蛋传递率,可以考虑使用抗生素浸泡方法,或者将抗生素注入火鸡蛋气室中或蛋小头端中的方法。由于支原体对抗生素抗菌株的出现,应用抗生素的种类和抗生素溶液浓度应当进行测定选择。另一方面是将经过检测证明未感染本病的雄性火鸡精液进行人工授精。对新孵出的火鸡雏及时检查,发现有症状的及时淘汰。壮观霉素在去除火鸡精液中的MM方面很有效。
2.建立无MM感染种火鸡群 参阅鸡毒支原体感染。
3.免疫预防 目前没有可防止火鸡MM感染的疫苗。