实验动物采血法
出处:按学科分类—农业科学 中国农业出版社《兽医微生物实验诊断手册》第49页(2622字)
一、采血注意事项
1.实验动物于采血前,应断食18~24h,仅供以饮水。
2.心脏采血时,抽注射器的筒心应缓慢。
3.采血后,立即将注射器的筒心取出清洗,以免注射器筒与筒心被血液粘住不易拔出。
4.采得的血液如需不凝固,可于10份血液中加入5%柠檬酸钠或草酸钾1份,摇动3~5min,使其与血液混合均匀。然后离心分离出血浆和血细胞。如欲分离血清,则不加抗凝剂,将血液盛于试管式三角瓶中,斜置使血液凝结成斜面,置温箱中1h,然后置冰箱中过夜则可析出血清。若事先用灭菌生理盐水将容器湿润,则析出血清较多。
二、小白鼠采血法
尾尖采血:少量血液可剪破或剪断尾尖,使血液自然流出,采血后用烧烙法止血。
心脏采血:小白鼠的心脏约高粱米粒大,故需使用细短针头及0.25或1m1注射器。采血前将小白鼠麻醉。具体方法是将小白鼠放入带盖的玻璃缸内,缸内放入润有乙醚的棉花小团,待小白鼠麻醉时,将其取出,仰卧固定于固定板上。术者右手持注射器,手掌边缘靠在固定板上使手稳定。用左手的食指及拇指横触左侧锁骨及剑突为标志点,在锁骨与剑突连线的中点,沿胸骨的左边缘将针头刺入约5mm深,轻抽注射筒心,若未见血液,可将注射器缓慢地稍向上提,并同时抽拉筒心,直至血液开始进入注射器为止。体重20g的小白鼠一般情况下可取血0.3ml。
后眼眶静脉丛穿刺采血:用左手的食指和拇指握住小白鼠颈部,同时从背部捉住小白鼠,利用颈部所施加的轻压力使头部静脉瘀血。术者右手持消毒的毛细玻璃管,从内侧(鼻侧)眼角将毛细玻管刺入眼眶,由鼻侧眼眶壁平行地对喉头方向推进就达到后眼眶静脉丛,血液自然流入吸管(图3-16)在得到所需的血量后,除去加于颈部的压力,同时抽出吸管。使用此法对小白鼠一次可采血0.2ml,并可在数分钟后,在同一穿刺孔重复采血。为了便于操作,可用0.5%潘妥卡因或10%可卡因滴入眼内,使眼部痛觉麻痹。若需避免血液凝固可将消毒的毛细吸管用抗凝剂湿润其内壁。
图3-16 小白鼠后眼眶静脉丛取血法
眼眶动脉和静脉采血法:用左手抓住鼠,拇指和食指尽量将鼠头部皮肤捏紧,使鼠眼球突出。右手取一无钩弯小镊,在鼠右侧眼球根部将眼球摘去,并将鼠倒置,头向下,此时眼眶内很快流血。此法一般约可取出4~5%鼠体重的血液量。
左前肢腋窝下采血:将白鼠麻醉后,腹部向上固定于固定板上。体表消毒后,将左胸皮肤剪开,并将皮肤与肌肉剥离,向左前肢展开而成一袋状,用消毒剪将左前肢腋下静脉剪开,用毛细吸管吸取流出的血液。此法可获得较多的血液。
三、豚鼠采血法
心脏采血:与家兔心脏采血基本相同。700克的豚鼠一次可采血10ml左右,隔2~3周可再采血。
耳缘采血:取少量血液,可剪破耳缘任其自然流出。
颈动脉放血:与家兔相同。
四、家兔采血法
耳缘静脉采血:获得少量血液可从耳缘静脉采取。助手将耳缘静脉的近心端按紧,术者用粗针头刺破静脉,此时按住血管的手仍不可放松,用试管接流出的血液。此法可采血2~5ml。
心脏采血:助手以左手各指分别将家兔的两耳及两前肢一起夹住,使两前肢拉向家兔的头后并靠于左手掌上,右手卡住家兔的腰部,使家兔仰卧于靠近桌角的桌边上。术者站于桌角的右旁进行采血(图3-17)。术者以食指摸着锁骨,以拇指摸着剑突作为标志;此两标志的中点即为进针处,也可用左手指触摸心脏跳动处为进针处。针头刺入2~3cm,由于心搏力量,血液自然进入注射器。切忌猛烈抽吸或使针头在胸腔内左右摆动,引起内出血。采血后,不让兔挣扎,放回笼中。2000g以上的家兔一次可采血20~30ml,隔2~3周后可再采血。
图3-17 家兔心脏采血法
颈动脉放血:将家兔仰卧于固定台上,前颈部剪毛,消毒,纵切开前颈部皮肤长约4~5cm,剥离皮下组织,露出肌层,用刀柄加以分离,即可见到强烈搏动的颈动脉。细心把迷走神经和颈动脉剥离开,将颈动脉的远心端结扎,下端用动脉钳夹住,在其中央剪一小口,插入玻璃弯管,用线扎紧,放开动脉钳,此时血液即经玻璃弯管流出,放血致死。
五、鸡采血法
翼根静脉采血:由助手将鸡固定,用碘酒、酒精消毒皮肤,术者用左手拇、食指压迫翼根静脉近心端,使血管怒张。右手持注射器沿静脉平行刺入血管,即可取血。一只成年公鸡此法可取血10~20ml。也可用针头将血管刺破,让血液自然流出,用毛细吸管吸取,或以短试管接取。
心脏采血:使鸡左侧向上横卧保定,拔去心脏部分的羽毛,寻找由胸骨走向肩胛部的皮下大静脉,心脏约在该静脉的分支下侧,有时用食指可摸到心脏跳动。用酒精消毒后,以碘酒标记针头刺入部位。针头刺入时,如触及胸骨可稍拔出,使针头稍向右偏,避开胸骨,再将针头向里刺入。此法每只鸡取血30ml不致造成死亡。
六、羊采血法
颈静脉采血:助手保定羊,术者左手拇指按压羊左侧颈静脉近心端,使血管怒张,右手执针头沿静脉以30度倾斜刺入血管,一次可采血50~100ml。若需避免污染,可用密闭采血法,即取橡皮管一根,其一端带有粗针头,另一端带有玻璃管,将带玻璃管的一端插入三角瓶内,瓶口塞纱布包的棉塞,将瓶口和针头包装,灭菌后备用。若需血液抗凝,可于瓶内盛玻璃珠,采血后,将血液摇振5min左右,脱去纤维蛋白,则可防止血凝。也可于瓶内放入抗凝剂(10%枸橼酸钠生理盐水4ml,可抗凝100ml羊血),采血后稍加摇振,此血置普通冰箱内可保存一周。