生长抑制试验

出处：按学科分类—农业科学 中国农业出版社《兽医微生物实验诊断手册》第209页（785字）

在霉形体的培养基中加入相应抗血清时，能抑制霉形体生长，此法具有高度特异性，已广泛应用于人和动物霉形体的血清学鉴定。

一、培养基

1．液体培养基 同代谢抑制试验。

2．固体培养基 先配制双倍浓度的液体培养基和2%琼脂(以Hanks液配制)，将琼脂溶解后冷至56℃，同时将双倍浓度液体培养基加温至56℃，二者等量混合，立即倒入无菌平皿，冷凝后备用。

二、标准阳性血清

用标准猪肺炎霉形体的对数期培养物，以20000g离心沉淀，洗涤2次后，制成百倍浓缩的悬浮液，超声波裂，免疫家兔制备。

三、抗血清圆纸片制备

将直径6mm的圆滤纸片，置于一平皿中，干燥灭菌、灭菌滤纸片平铺于平皿上，每一纸片加1滴抗血清，45℃干燥2～3h，干后取出，-20℃保存备用。

四、试验操作

在制备好的固体培养基上，接种经液体培养基复壮并纯化的待检菌种培养物，100倍稀释，每皿0．15ml，用无菌L棒将培养物在琼脂表面均匀铺开，稍干后，将抗血清纸片以适当距离置于琼脂表面，置含5～10%CO₂的温箱中，37℃培养7～14天，待菌落长出后，观察结果。

五、结果判定

将培养皿置低倍显微镜下观察菌落生长，在目镜中装一测微尺，在圆纸片周围四个相互垂直的位置上测量纸片边缘与菌落生长带的距离，取其平均值计算生长抑制带宽度，宽度在1mm以上鉴定为猪肺炎支原体，在0．5～0．1mm者为可凝，0．5以下判为非猪肺炎霉形体。