口蹄疫病毒中和试验操作技术

出处：按学科分类—农业科学 农业出版社《动物检疫手册》第29页（1264字）

病毒中和试验有固定血清稀释病毒及固定病毒稀释血清法，一般多采用前者。多用于检测患畜血清中是否含有特异的中和抗体。

(一)固定血清稀释病毒中和试验操作技术

1．病毒稀释液的制备。

(1)将被感染组织毒加入灭菌玻璃沙和少量pH7．6的磷酸盐缓冲液，于灭菌之冷乳钵中研成糊状，然后以pH7．6的磷酸盐缓冲液稀释成1∶5的混悬液，置4℃冰箱中浸毒4－16小时，再以每分钟1500－2000转离心10分钟后，取上清备用。

(2)将灭菌试管9支排列在试管架上，每管加入pH7．6的磷酸盐缓冲液4．5毫升。

(3)将上述混悬液10进位稀释，即得1∶50、1∶500、1∶5000……的病毒稀释液，当加入等量血清后，即成10^-2，10^-3……。

2．病毒稀释度的选择。如该病毒的LD₅₀(半数致死量)初步测定为10^-7时，则实验组病毒稀释度应选用10^-1，10^-2，10^-3，10^-4，10^-5，10^-6，10^-7，而对照组应选用10^-5，10^-6，10^-7，10^-8之稀释度。

3．病毒与血清混合液的配制。将等量血清与不同稀释度的病毒相混合后，经37℃30分钟或室温1－2小时感作，然后接种4－7日龄乳鼠。

4．试验结果的判定。其结果以中和指数表示，即表明被检血清中有无中和抗体及其中和病毒的能力。为求中和指数，应先计算出病毒加对照血清和被检血清的LD₅₀，此二者的差数之反对数即为中和指数。

举例说明如下：

(二)固定病毒稀释血清中和试验 选择适当剂量之病毒(一般为100LD₅₀或1000LD₅₀，根据具体情况决定)与不同稀释度之血清等量混合，接种4－7日龄乳鼠，以能保护乳鼠不致死亡的血清稀释度作为终点。举例说明如下：

上项试验结果，能保护动物的血清稀释度界于10^-1．2－10^-1．8之间。

-1．66的反对数-1／46，即表明1∶46的血清可保护50%的动物免于死亡。

中和指数在诊断上的意义：中和指数在9以下为阴性，10－49之间为可疑，50以上为阳性。