炭疽沉淀反应操作技术

出处：按学科分类—农业科学 农业出版社《动物检疫手册》第84页（1307字）

(一)材料准备

1．器材。小试管、细玻璃管(内径3－4毫米，长7－10厘米)、小漏斗、乳钵、中性石棉、煮沸锅等。

2．炭疽沉淀素血清。有瓶装和一次性使用的细管装。

3．炭疽标准沉淀原。

4．沉淀原的制备。

(1)脏器：采取可疑炭疽患畜脾(或肝、血液等)一小块，放乳钵内研细后，加5－10倍生理盐水制成乳剂，装入试管中，水浴煮沸15－30分钟取出冷却，用中性石棉或滤纸过滤，得到透明的滤液即成，如滤液不透明，再滤过一次，直到透明为止。

(2)皮张：检查可疑炭疽皮张时，须先将被检材料高压消毒30－60分钟(如为鲜皮，须经干燥后再行高压灭菌较好)，冷却后剪成不少于1克的小块，盛于容积30－50毫升的广口瓶中，倾入生理盐水(或用内含0．3%石炭酸的生理盐水)，其比例为1∶5－10(即1份皮张加5－10份生理盐水)，置于8－14℃温度中浸出14－20小时，然后以中性石棉或滤纸过滤，得完全透明的液体即为抗原。

(二)操作方法 取少量沉淀素血清加于细玻璃管中(沉淀素如系熔封在细玻璃管中者，可将玻璃管由中间锯断，分成两部使用)，再用毛细吸管吸取等量沉淀原沿管壁轻轻加在沉淀素血清之上层，静置5－10分钟后观察两液接触面的变化。操作时，应置下列对照。

1．炭疽标准沉淀原+炭疽沉淀素——阳性；

2．炭疽标准沉淀原+健康马血清——阴性；

3．生理盐水+炭疽沉淀素——阴性。

(三)判定标准

1．若被检样品沉淀原与炭疽沉淀素血清接触面出现清晰白色沉淀环者，应判为阳性。

2．凡在一定时间内不出现白色沉淀环者，则判阴性。

3．如白色环不明显或模糊不清不能判定者，应重复检查。

(四)注意事项

1．沉淀素血清浑浊者，不宜当时使用，应置于冷暗处(2－15℃)15－20天后方可使用。如仍不澄清，则不能用。

2．冻过的沉淀素血清不能应用，过期的也不能应用。

3．在检查时，对被检沉淀原的制备应特别注意防止散毒及避免人身感染。

4．本反应要在15－20℃以上的条件下进行。