薄层色谱法

出处：按学科分类—农业科学 中国农业出版社《农作物品种鉴定手册》第105页（2878字）

薄层色谱法是一种新型的快速、微量，操作简便的分离技术。加拿大的Dhesi等人利用薄层色谱法对大田作物品种鉴定进行了许多研究。

1．基本原理 薄层色谱法是在平滑的玻璃板上(或聚酯薄膜上)，把吸附剂铺成薄层作为固定相，用溶剂(流动相)把样品浸出液展开，流动相液体从固定相的间隙通过时，由于样品中各组分在固定相和流动相之间的分配系数不同，因而随着流动相的移动，各组分彼此相互分离开，而获得薄层色谱图。从所得色谱斑点测定其Rf值。根据不同品种色谱图上的斑点和Rf值的差异，进行品种鉴定。

2．应用实例 现将加拿大Dhesi等人应用薄层色谱法鉴定农作物品种的研究方法摘引如下，供参考。

(1)吸附剂 一种为硅胶G加水；另一种是硅胶G加醋酸钠。

(2)玻璃板 采用20×20cm的玻璃板，其上涂上0．25mm厚度的吸附剂。

(3)活化 在使用前将涂有吸附剂硅胶的薄板放在100℃烘箱活化1小时，冷却后用样规在薄层上画上每个样品的起点位置。

(4)样品的制备和加样 取在室温(25℃)土床上培养的3－4周幼苗叶片，在室温下气干。称取1g放入研钵磨碎，并加入含有1%盐酸甲醇溶液在黑暗下浸提48小时；大豆每克干叶加5ml上述提取液；黑麦草每克干叶加10ml提取液。

种子也可用类似方法提取，每克燕麦种子粉用2．5ml盐酸甲醇；每克黑麦种子粉用5ml盐酸甲醇，然后将提取液离心10分钟，取其上清液，作为薄层色谱板点样的样品。用微量进样器吸取提取液加在画好的位置上。每个品种加10μl提取液。加样时，用热风吹干。

(5)溶剂展开

A．展开溶剂

1)硅胶加水吸附剂

①D－1丁酮3份，醋酸乙酯5份和水1份配成。

②D－2戊醇2份，醋酸1份和水1份配成。

③D－3丁醇4份，醋酸1份和2．2份水配成。

2)硅胶加醋酸钠吸附剂

①D－4甲苯5份、甲酸乙醇4份、甲酸1份配成；

②D－5苯5份，甲酸乙酯4份，甲酸1份配成。

B．展开方法 在层析缸里加入300ml展开溶剂，然后将薄板放入层析缸内，让其一边浸入展开溶剂里进行样品的展开分离。当展开溶剂上行达到所希望的高度后，取出薄板气干。

(6)检出显色 待薄板干燥后，喷上1%联苯酚－硼酸－氨基乙醇－甲醇溶液，等到干燥后，再喷上1%联苯酚硼酸氨基乙醇甲醇溶液和10%氨基乙醇甲醇混和液(v／v1∶1)。然后将薄板拿到紫外光下判读。按其颜色和Rf值进行分离斑点的记录，也可拍照和测量。

(7)品种鉴定 根据不同品种薄层色谱图像的颜色和Rf值之间的差异，鉴别不同品种。但为了鉴定的正确和可靠起见，最好同时做标准样品的薄层色谱分析，并在测定时设适当的重复。

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