Folin－酚法
出处：按学科分类—医药、卫生 中国科学技术出版社《食物营养分析实用手册》第113页（2777字）
福林－酚法是测定蛋白质应用非常广泛的一种方法，其显色原理为：在碱性条件下，蛋白质与铜作用生成蛋白质——铜复合物。蛋白质——铜复合物还原磷钼酸——磷钨酸试剂，生成蓝色物质。在一定条件下，蓝色强度与蛋白质含量成正比。
本法的优点是操作简便、灵敏度高，较双缩脲法灵敏100倍。缺点是各种蛋白质的酪氨酸含率不同，生色强度也不同。因此最好使用同种蛋白质作标准。同时干扰物质较多。所以也出现了不少修改的方法。
方法一：劳里法
试剂
(1)试剂A：(甲)10克碳酸钠，2克氢氧化钠和0．25克酒石酸钾钠，溶解于500毫升蒸馏水中。(乙)0．5克硫酸铜(CuSO4·5H2O)溶解于100毫升蒸馏水中。使用前将(甲)50份与(乙)1份混合，即为试剂A。
(2)试剂B：在1．5升容积的磨口回流瓶中加入100克钨酸钠(Na2WO4·2H2O)，25克钼酸钠(Na2MoO4·2H2O)及700毫升蒸馏水，再加50毫升85%磷酸，100毫升浓盐酸充分混和，接上回流冷凝管以小火回流10小时。回流结束后，加入150克硫酸锂，50毫升蒸馏水及数滴液体溴，开口继续沸腾15分钟以便驱除过量的溴，冷却后溶液呈黄色(如仍呈绿色，须再重复滴加液体溴的步骤)稀释至1升，过滤，滤液置于棕色试剂瓶中保存。使用时用标准氢氧化钠滴定，以酚肽为指示剂，然后适当稀释(约加水0．9～1倍)使最终的酸浓度为1N。
(3)蛋白质标准溶液：称结晶牛血清白蛋白溶解于蒸馏水，使其浓度为25毫克／100毫升(即250微克／毫升)。
操作步骤
1．待测样品液的制备：样品烘干粉碎，取0．05～0．1克(视含蛋白的高低)。谷物加少量1N氢氧化钠。豆类等加少量10%氯化钠，在研钵中研磨提取蛋白质。然后加蒸馏水稀释到一定体积，使每毫升提取液中约含25～250微克的蛋白质。
2．待测样品的测定：取1毫升待测样品溶液，加5毫升试剂A，摇匀在室温下放置10分钟，再加入0．5毫升试剂B，立即混合均匀(混合要快，否则影响显色效果)。30分钟后，在波长650nm或660nm，进行比色测定。
用不含蛋白质的试剂作空白调零，于721型分光光度计进行比色测定。根据光密度，对照标准曲线，求出样品液中蛋白质微克含量。
3．标准曲线的制作：分别在各试管中加入蛋白质标准溶液(250微克／毫升)0，0．2，0．4，0．6，0．8和1毫升，并分别用蒸馏水补充到1毫升(即各管中分别含蛋白质量0，50，100，150，200和250微克)。以后加试剂及比色等操作与样品操作相同。
4．计算：
式中：X：由标准曲线查得样品测定液中蛋白质含量(微克)；
Y：比色时所用样品液的量(毫升)；
V：样品蛋白质提取液总体积(毫升)；
W：样品称重(克)；
100：换算成100克样品中蛋白质含量换算系数；
：微克换算为克的换算系数。
〔注〕一般每毫升含蛋白质25～250微克时，在721型分光光度计上，选用650nm或660nm波长即可。若蛋白质浓度在20～100微克，也可选用750nm；125微克以上可采用500nm。在660nm所读取的光密度为750nm时的90%。
方法二：本沙杜恩和温斯坦(Bensadoun & Weinstein)的改良法
该方法为在有干扰物质存在下改良的劳里法。劳里法的干扰物质有：①还原物质：－SH系列化合物如2－巯基乙醇、谷胱甘肽、半胱氨酸等。②酚类(硝基苯酚除外)。③氨基酸类：如酪氨酸、色氨酸、组氨酸、甘氨酸等。④糖类：蔗糖、葡萄糖、果糖、甘油等。⑤羧酸：琥珀酸、柠檬酸等。⑥其它：EDTA、Tris，硫酸铵，K+，Co++等。
本沙杜恩和温斯坦为了排除以上干扰物质，采用脱氧胆汁酸钠和三氯乙酸相结合，使1～50微克的蛋白质沉淀，沉淀了的蛋白质通常可用劳里法进行定量测定。
试剂
(1)试剂A和B同前。
(2)2%脱氧胆酸钠溶液：2克脱氧胆酸钠加蒸馏水至100毫升。
(3)24%三氯乙酸(TCA)溶液：120克三氯乙酸加蒸馏水至500毫升。
操作步骤
1．样品液测定：取一定量待测样品液在离心管中加蒸馏水至9毫升，再加2%脱氧胆酸钠0．075毫升，剧烈混合，放置15分钟。加24%三氯乙酸溶液3毫升，混和后于3500转／分钟离心30分钟。小心倾去上清液(上清液在管中残留量不得大于0．05毫升)。加试剂A4.5毫升。剧烈混和，蛋白质沉淀在30秒钟内溶解，加0．45毫升试剂B，迅速摇匀。放置30分钟后，以不含蛋白质的试剂空白作对照在660nm波长下测定光密度。
2．标准曲线的制作：以牛血清白蛋白，浓度在25～250微克／毫升范围内制作标准曲线。方法同劳里法。
〔注〕：蛋白质溶液很稀(＜25微克／毫升)时，也可用此沉淀手段进行测定．只要使脱氧胆酸钠的浓度控制在125微克／毫升条件下用三氯乙酸将蛋白质完全沉淀下来，就可进一步分析。