紫外吸收法(经验公式快速测定法)
书籍：食物营养分析实用手册
出处：按学科分类—医药、卫生 中国科学技术出版社《食物营养分析实用手册》第117页（915字）
蛋白质分子中所含的酪氨酸、色氨酸和苯丙氨酸残基使蛋白质在280nm下具有最大吸收值，在无其它干扰物质时，280nm的吸光度即可作蛋白质的测定用，但不同种的蛋白质对280nm波长的光吸收强度因芳香性氨基酸残基含量的不同而有差异，1毫克／1毫升浓度的不同蛋白质的吸光度值在0．5～2．5之间。因此需用同种蛋白质作对照结果才可靠。
试剂和仪器
(1)0．9%NaCl溶液。
(2)751型紫外／可见光分光光度计。
操作步骤
此法适用于蛋白质浓度为0．1～0．5毫克／毫升。
1．样液测定：取未知浓度的蛋白液1．0毫升加0．9%NaCl3．0毫升，混匀。
以0．9%NaCl作空白调零点。在紫外分光光度计上分别测定样品液在波长280nm和波长200nm的光密度(用光径1厘米的石英比色杯盛溶液)。
2．计算：当从生物材料提取的蛋白质中含有核苷酸或核酸时，由于核酸的吸收峰值在260nm附近，故经验公式为：
式中：
表示光径为1厘米的石英比色杯，在波长
280nm的吸光度。
表示光径为1厘米的石英比色杯，在波长
260nm的吸光度。
1．55和0．76：为经验公式的系数。
以上公式是将280nm的吸光度和260nm的吸光度各乘以系数，然后相减求得近似的蛋白质浓度。
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