标本制作及细菌大小的测定

出处：按学科分类—农业科学 中国农业出版社《兽医微生物实验诊断手册》第56页（1848字）

一、标本制作法

(一)组织脏器涂片的制作 用镊子夹持脏器局部，以灭菌或洁净的剪刀剪取一小块，将其新鲜切面在载玻片中部表面轻轻压印或轻而迅速涂抹，任其自然干燥，即成组织触片或抹片。

(二)血片的制作 取载片一张，将病畜血液一小滴(米粒大小)于载玻片的一端，左手拇指与中指持载玻片的两端，右手持推片(选用边缘光滑平整的载玻片)与血滴接触后，轻微向左右移动，使血滴沾附推片与载片之间，形成30～45度角向前推进涂抹，使涂成薄薄的一层血膜。如蘸取的血液过多，必须将推片提前，在血滴的前方再接触载片，等血液扩散后再向前推进涂抹。涂抹时推片与载片之间角度要适当。推进速度适中，用力均匀，并要一推到底，中间不能停顿。血膜的长度最好不短于载玻片的三分之一，玻片的两侧应留有空隙。良好的血片必须薄而匀，对光观察有荧光。血膜片在空气中自然干燥。

(三)培养物涂抹标本的制作

1．固体培养物标本的制作。用灭菌的接种环取一滴生理盐水置载片中央，然后以左手持培养瓶或试管，瓶底(管底)握于手中，右手拇指、食指、中指执接种环柄，将接种环在酒精灯火焰中烧灼灭菌，以右手小指和无名指扭开瓶塞或管塞，棉塞头向掌心内，将瓶口(管口)通过酒精灯火焰灭菌，然后将烧灼的接种环放在管口冷却一下再蘸取培养物少许，同样将管口通过火焰灭菌后，塞好塞子，放入架上。最后将接种环上的培养物置载片上的生理盐水中混匀，涂成小指大厚薄适宜的抹面，接种环进行烧灼灭菌。

2．液体培养物标本的制作。用灭菌冷却的接种环取液体培养物1～2环置载玻片中央，然后涂成小指大厚薄适宜的抹面即可。

(四)暗示野标本的制作及检查法 暗示野显微镜的聚光器下面中央有一遮光板，以阻断来自反光镜中部的光柱，使光线不能直接通过聚光器中部射入镜筒，而只能以聚光镜的四周边缘斜角反射到标本上，由于散射的作用，使标本发出亮光，其标本制备及检查方法如下。

1．用灭菌接种环取被检材料一滴置载玻片中央，在液滴上轻轻压盖玻片，做成压滴标本。

2．将暗示野集光器上升与镜台平行，然后在集光器上滴加香柏油一滴，并将集光器稍微下降。

3．置被检标本片于载物台上，将集光器上升，使香柏油和载玻片的压滴接触，于盖片上加香柏油一滴，最好用暗视野油镜检查。

4．当被检标本中有细菌存在时，则反射的光线通过镜筒达到目镜，在暗示野中可见到好似闪亮的小玻璃珠样的菌体。

5．镜检完毕、关灯，将集光器放下，镜头提高，擦镜纸拭去物镜与集光器上的香柏油，其标本片放于消毒液中。

二、细菌大小的测量

测量细菌大小的装置称为测微计，它由两部分组成，一是接目测微计，二是接物测微计(图4-2)。

接目测微计：为一个圆形玻片，中央部刻有50～100个等分小格，小格的长度不定，随接目镜与接物镜的放大倍数不同而异。因此测量细菌大小之前，必须应用接物测微计来确定每一个小格的长度，使用时将接目测微计装入接目镜的中间部。

接物测微计：在玻片的中央，胶着一圆形小玻片，在上面刻有100个小格，每一小格的长度为10μm，其全长为1mm。

测量法：首先固定镜筒的长度，然后在油镜下使接物测微计与接目测微计的小格重叠。借以求出接目测微计的一个小格的绝对值。

例如：接目测微计的7个小格与接物测微计的一个小格重叠时，则接目测微计一个小格的值为7∶10=1∶x，x=10／7，x=1．43，即1个小格为1．43μm。

然后，取下接物测微计，放上欲测标本，检查标本上的细菌的长或宽相当于接目测微计的几个小格，即为菌体的长或宽。