原理

出处：按学科分类—医药、卫生 中国科学技术出版社《临床厌氧菌检验手册》第111页（556字）

1．PCR技术原理 PCR是体外酶促合成特异的DNA片段的一种方法。由高温变性、低温退火和适温延伸等几步反应组成一个周期，循环进行，使目的DNA得以迅速的扩增。由于每一周期所产生的DNA均能成为下一次循环的模板，所以PCR产物以指数方式增加，经过25～30次周期之后，理论上可增加10⁹倍，实际上至少可扩增10⁵，一般可达10⁶～10⁷。

2．杂交原理简述 DNA是由4个主要碱基构成腺嘌呤(A)、鸟嘌呤(G)、胞嘧啶(C)、胸腺嘧啶(T)组成的双链结构。这4个碱基对严格按型配对原则：C=G，A=T配对，如GAATTCCTTAAG。DNA加热至一定温度或在NaOH作用下，双链被解开成单链，这叫做“变性”。在一定条件下解链后的单链又可回复成双链结构，这叫做“复性”。将待检标本中的DNA解链成单链，固定在硝酸纤维素的滤膜上。将DNA探针也解链成单链，加在杂交液中，与滤膜上固定的DNA标本杂交，如标本DNA与探针DNA是同源的，便会按配对原则，复性或双链结构，将探针固定在滤膜上，将滤膜充分洗涤，去掉未结合的探针，然后加入光片，在低温下自显影，被标本结合在探针上的同位素使胶片显影，未结合探针的标本便不能显影。