比色法测定泛酸含量

出处:按学科分类—医药、卫生 中国科学技术出版社《食物营养分析实用手册》第172页(1920字)

泛酸(维生素B5)存在于动植物体中,易溶于水,可以较容易地在加热中将其提取出来,

泛酸盐的分子被酸分解后,将生成的β-丙氨酸用氯化剂处理,然后再与碘化钾溶液作用,所释放出的游离碘用分光光度法测定。

试剂

(1)离子交换树脂:Dowex50W-X4强酸型阳离子交换树脂(H+型),100~200目。

(2)漂白土:Feorisil,60~100目。

(3)氯化剂:4%~6%的次氯酸钠溶液1份,加30份0.05M硼酸盐缓冲液,临用前配制,避光保存。

(4)酸化苯酚溶液:0.5%苯酚的0.1N盐酸溶液。

(5)碘化钾溶液:1%水溶液,可使用一周。

(6)酚肽试剂:0.02%乙醇溶液。

(7)泛酸钙标准溶液:称500毫克泛酸钙,溶于100毫升水中,取10微克此液稀释至100微克,此溶液含有泛酸钙50微克/毫升,冰箱保存。

操作方法

1.离子交换柱的制备

(1)色谱柱管规格为:硼玻璃管Ф12mm×300mm,下端具有多孔玻璃板。

(2)阳离子交换树脂和漂白土用水漂洗,洗去大部分细粒,存在于水中备用。

(3)每一个样品用三个层析柱,标准溶液一个柱,样品溶液两个柱。

(4)先在每根层析管中放入5cm高的漂白土,再放一层玻璃棉,玻璃棉上再加5cm高的一层阳离子交换树脂。

(5)用15毫升1N盐酸洗涤树脂,再用150毫升水漂洗,每次分析前制备新层析柱。

2.样品测定:

(1)取药物泛酸钙,配制成含泛酸钙约为0.05微克/毫升的样品液。

(2)分别吸取10.0毫升样品液和标准液,加入到各自的层析柱上。

(3)用70毫升水洗层析柱,洗涤液用锥形瓶承接,再加入5毫升2NHCl至洗涤液中,置121℃的压力锅中加热30分钟,冷却后稀释至100毫升。

(4)另取10毫升样品液加入到另一层析柱中,用70毫升水洗脱,洗脱液直接稀释至100毫升作为样品空白。

(5)分别取10毫升样品溶液,样品空白液,标准溶液,置三个50毫升锥形瓶中,各加2滴0.02%酚肽试剂,用2N氢氧化钠滴定到微红色,再用0.1N盐酸滴定至红色刚好褪去。

(6)再加入1毫升氯化剂到混合液中,加盖,放置15分钟,加入1毫升酸化苯酚溶液,分解除去过量的次氯酸。

(7)混匀,盖上瓶盖放置5分钟,加入1毫升碘化钾溶液,并立即依次向每个瓶中加入20毫升无水乙醇(应立即加,以防碘在水中褪色)。

(8)将溶液转入50毫升容量瓶中,用无水乙醇稀释至刻度,混匀,放置10分钟,使生成的色泽最佳。

(9)用10毫升水和相应的试剂按操作步骤配制试剂空白溶液。调零用。

(10)测定各溶液在358nm波长处的吸光值,在此条件下,碘的颜色可以稳定24小时。

3.计算:

式中:A:样品吸光度;

A′:标准溶液吸光度;

标称值:药品中泛酸钙的含量标出值。

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